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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1 mL |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 42001ES03 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱
產品編號
規格
價格（元）
Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays
ADCC檢測用Jurkat效應細胞株
42001ES03
1mL（5E6 Cell/mL）
詢價
產品描述
抗體依賴細胞介導的細胞毒作用（antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity，ADCC）是抗體發揮作用的方式之一，當IgG抗體通過Fab段與靶細胞（病毒感染的細胞及腫瘤細胞）表面抗原決定簇特異性結合后，其Fc段可與有FcγR的殺傷細胞（NK細胞、單核-巨噬細胞、中性粒細胞）等效應細胞結合，觸發效應細胞的殺傷活性，直接殺傷靶細胞（病毒感染的細胞及腫瘤細胞）。
圖：抗體依賴細胞介導的細胞毒作用（antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity，ADCC）
ADCC檢測用Jurkat效應細胞株為改造后的NFAT-Luc-FcγRIIIa Jurkat穩定細胞株（原始株來源于中科院細胞庫），可由CD20抗體，B細胞淋巴瘤細胞（Raji、PBMC、WIL2-S細胞系等）作為靶細胞來建立ADCC生物學活性檢測方法。YEASEN開發的Jurkat效應細胞株無菌、無支原體污染，細胞株為單克隆細胞株，可用于ADCC作用機制驗證、糖基化水平檢測、抗體篩選等應用。
產品組分
組分編號
組分名稱
產品編號/規格
42001ES03
42001
Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays
1mL（5E6 Cell/mL）
運輸與保存方法
干冰運輸。收到之后如不立即復蘇，請立即轉入-80℃保存或液氮儲存。
產品應用
1）. Jurkat效應細胞株運輸與保存
【注】：細胞株對溫度非常敏感，避免反復凍融。收到產品后，如果暫時不使用，請整瓶直接放到-80℃凍存或液氮內。
2. Jurkat細胞株復蘇使用特別注意
打開水浴鍋，等待升溫達到設置的37 ℃后，放入配制好的種子培養基進行預熱30±10 min，凍存管立即置于37℃水浴中解凍（控制在3 min內），溶解*即可拿出，解凍過程中勿使水浴鍋水面浸過凍存管管口。此細胞株血清使用要求嚴格，檢測時使用推薦超低 IgG胎牛血清。（推薦：貨號:1921005PG，Gibco）
2）.抗體檢測ADCC
配制細胞：將Jurkat效應細胞、raji靶細胞株200 g或1000 rpm 離心5 min 后用ADCC緩沖液（RPMI 1640培養基+4%低IgG FBS）重懸洗滌一次后，計數，調節活細胞密度（raji推薦5E5 Cells/mL；Jurkat推薦3E6 Cells/mL）可進行調試標靶比， Jurkat效應細胞株密度建議不調整。細胞株活率＞95%。方可進行實驗。一般活率在98-99%之間。
稀釋抗體：將抗體調節較高濃度成20 µg/mL后，進行梯度稀釋，低濃度時如3 µg/mL可按2-3倍進行梯度稀釋；高濃度可按5倍稀釋。先確定細胞的檢測抗體濃度范圍后，再進行濃度和梯度稀釋比例的調整。
1、將75 µL ADCC Buffer添加到96孔板的最外面的孔中，封液，防止蒸發。
2、輕輕吹打raji細胞懸液，加入25 µL細胞懸液每孔。
3、從抗體稀釋板中每孔加入25 µL抗體稀釋系列，加入到細胞孔內?？瞻撞患涌贵w，加入25 µL ADCC緩沖液。建議從低濃度到高濃度進行添加。
4、輕輕吹打Jurkat效應細胞懸液，然后在實驗臺上添加25 µL Jurkat效應細胞，則每孔抗體濃度稀釋三倍。（母液濃度為3 µg/mL，則檢測起始起始濃度為1 µg/mL。）
5、用蓋子蓋住板，在37°C加濕的CO2中孵育6小時。
6、從37°C的培養箱中取出檢測板，并將其平衡到環境溫度(22-25°C)，一般放置20-30 min即可。
7、使用手動多通道移液管，添加75 µL Bio-Glo™熒光素酶分析試劑到所有內部96孔板；避免制造任何泡沫。孵育5分鐘后用酶標儀在白板中讀取相對光單位（relative light units,RLU）數值，并按照以反應-陰性作圖。
陰性：Jurkat效應細胞株+靶細胞，不含抗體，Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit檢測值
反應：Jurkat效應細胞株+靶細胞，含抗體，Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit檢測值
例：TECAN Spark 酶標儀檢測設置：Luminescence，360-700 nm，實驗檢測時間設為10000 m sec；settle time：1 sec；
SpectraMax M5酶標儀檢測使用設置：Luminescence，All nm，實驗檢測時間設為500-1000m sec；settle time：1 sec。
3）實驗結果
①抗體檢測：
TECAN Spark 酶標儀檢測設置：Luminescence，360-700 nm，實驗檢測時間設為10000 m sec；settle time：1 sec；
使用3 µg/mL母液抗體濃度，按2.5倍稀釋，稀釋13倍；抗體為：Rituximab, E:T=6:1
圖：檢測值比較明顯值在(log -10至-6的區間內)
注意事項
1、反應溫度：酶促反應對溫度較為敏感，加樣檢測前務必將所有試劑平衡至室溫（20-25℃）再使用。
2、Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit應在環境溫度不超過27℃使用，使用時解凍后繼續在室溫下孵育20-30分鐘，和96孔白板溫度保持一致。
3、檢測儀器：能檢測化學發光的儀器都適用，但由于不同儀器的設置檢測時間段和靈敏度不同，測得的光信號值也會不同。
4、檢測板：為防止孔間干擾，推薦使用不透光白色酶標板。
5、本產品僅作科研用途，禁止應用于人體。
6、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
HB220330
