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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 11370ES24 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
5 × Frag/Prime Buffer
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
5 × Frag/Prime Buffer | 11370ES24 | 24T | 292.00 |
11370ES96 | 96 T | 792.00 |
產品描述
本產品銜接Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit for Illumina® (Yeasen: Cat#12251)或者Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit for MGI® (Yeasen: Cat#13332)，替代其中的Frag/Prime buffer使用，用于RNA的片段化和一鏈cRNA合成步驟。Input RNA可以是total RNA，也可以是mRNA純化的產物、rRNA去除的產物等。由于在Cat#12251或Cat#13332中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脫mRNA純化或rRNA去除操作中所得的RNA，沒有額外的體積用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已經溶解于Nuclease free H2O中，可選擇本產品進行RNA片段化或一鏈cDNA合成反應。
產品組分
組分編號和名稱 | 11370ES08 | 11370ES24 | 11370ES96 | ||
11370-A |
| 5×RT/Frag Buffer | 40 μL | 120 μL | 480 μL |
11370-B |
| Random Primer | 8 μL | 24 μL | 96 μL |
運輸與保存方法
干冰運輸，-20°C存放。效期1年。
注意事項
1. 請使用無RNase污染的耗材，并對實驗區域定期進行清理，推薦使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除噴霧去除RNA酶污染。
2. Input RNA請溶于Nuclease free H2O，避免Mg2+的存在干擾片段化效果；Input RNA大投入體積為11 μL，在進行洗脫時請注意洗脫體積的選擇。
使用方法
當Input RNA是不需要片段化時，請選擇方案A；當Input RNA是需要片段化處理時，請選擇方案B。
A1. 若Input RNA無需片段化處理，可結合Cat#12251或Cat#13332試劑按照表1，直接配制第—鏈cDNA合成反應體系。
表1 直接進行第—鏈cDNA合成反應體系
名稱 | 體積（μL） |
Input RNA | 11 |
5×RT/Frag Buffer | 5 |
Random Primer | 1 |
Strand Specificity Reagent | 6 |
1st Strand Enzyme Mix | 2 |
Total | 25 |
A2. 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應液離心至管底，按照表2反應程序于PCR儀中進行一鏈合成反應。一鏈合成產物可銜接Cat#12251或Cat#13332進行后續反應。
表2 第—鏈cDNA合成反應程序
溫度 | 時間 |
熱蓋 105°C | On |
25°C | 10 min |
42°C | 15 min |
70°C | 15 min |
4°C | Hold |
B1. 若Input RNA需要進行片段化處理，可按照3配制片段化體系進行RNA片段化。
表3 片段化反應體系
名稱 | 體積（μL） |
Input RNA | 11 |
5×RT/Frag Buffer | 5 |
Random Primer | 1 |
Total | 17 |
B2. 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應液離心至管底，根據Input RNA的完整度和實驗目的，參考Cat#12251或Cat#13332說明書設置合適的片段化條件。
B3. 片段化產物進行一鏈cDNA合成，按照表4配制一鏈cDNA合成反應體系。
表4 第—鏈cDNA合成反應體系
名稱 | 體積（μL） |
Fragmented RNA | 17 |
Strand Specificity Reagent | 6 |
1st Strand Enzyme Mix | 2 |
Total | 25 |
B4. 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應液離心至管底，按照表2反應程序于PCR儀中進行一鏈合成反應。一鏈合成產物可銜接Cat#12251或Cat#13332進行后續反應。
相關產品
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit for Illumina® | 12251ES08//24/96 | 8/24/96 T | 3272．00/ 8372.00/ 28772.00 |
Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit for MGI® | 13332ES08/16//96 | 8/16/96 T | 3152.00/ 8752.00/ 36852.00 |
HB200414
