聯系電話
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級會員·13年
具體成交價以合同協議為準
- 聯系人：
- 曹女士
- 電話：
- 400-6111-883
- 手機：
- 售后：
- 4006-111-883
- 傳真：
- 86-21-34615995
- 地址：
- 上海市浦東新區天雄路166弄1號3樓
- 網址：
- www.yeasen.com
掃一掃訪問手機商鋪
產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 40705ES03 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 外觀 | 儲存 | 價格（元） |
JC-1 線粒體膜電位熒光探針 | 40705ES03 | 1 mg (5 mg/mL) | 溶液 | -20℃避光保存 | 615.00 |
JC-1 線粒體膜電位熒光探針 | 40705ES08 | 5 mg | 紅褐色粉末 | -20℃避光保存 | 2450.00 |
產品描述
JC-1 是一種廣泛用于檢測線粒體膜電△Ψm位的理想熒光探針。JC-1染料以電勢依賴性的方式積聚在線粒體內，可以用來檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。正常線粒體內，JC-1聚集在線粒體基質中形成聚合物，聚合物發出強烈的紅色熒光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的線粒體由于膜電位的下降或喪失，JC-1只能以單體的形式存在于胞漿中，產生綠色熒光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。JC-1不僅可用于定性檢測，因顏色的變化可以非常直接的反映出線粒體膜電位的變化。也可以用于定量檢測，因線粒體的去極化程度可以通過紅/綠熒光強度的比例來衡量。觀察時，只需使用常規的觀察紅色熒光和綠色熒光的設置即可。
JC-1 用于檢測細胞的線粒體膜電位時常用的濃度范圍為 1～20 µg/mL，對于很多細胞適宜采用的 JC-1濃度為 10 µg/mL。
產品性質
化學名稱（Chemical name） | 5,5‘,6,6’-Tetrachloro-1,1‘,3,3’-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide |
CAS號（CAS NO.） | 3520-43-2 |
分子式（Formula） | C25H27Cl4IN4 |
分子量（Molecular Weight） | 652.23 |
純度（Purity） | ＞95%（HPLC） |
外觀（Appearance） | 紅褐色粉末 |
溶解性（Solubility） | 溶于DMSO和DMF，不溶于水 |
熒光光譜 （Fluorescent spectrum） | 單體形式（monomer form）：Ex=514 nm, Em=529 nm 聚合物形式（J-aggregate form）：Ex=585 nm, Em=590 nm |
結構式 |
|
運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。
粉末-20℃干燥避光保存，至少一年有效。儲存液分裝成單次使用量，-20℃干燥避光保存，避免反復凍融，約一年有效。
使用方法
1. 工作液配制：
1）JC-1粉末（5 mg）：直接加1 mL DMSO到粉末內，室溫顛倒混勻使其充分溶解，即得到5 mg/mL的儲存液。溶液分裝成小量儲存于-20℃，避光干燥，避免反復凍融。
2）JC-1儲存液（1 mg in DMSO）：本品是JC-1的DMSO儲存液，濃度為5 mg/mL。使用者需要根據單次用量來分裝，-20℃避光干燥，避免反復凍融。
3）工作液配制：將凍存的儲存液置于室溫充分融化，之后用緩沖液或者預熱的培養基直接稀釋儲存液（5 mg/mL）到需要的工作液濃度，邊震蕩邊稀釋，充分混勻。為了去除任何不溶顆粒，建議13,000 x g離心JC-1工作液1 min，小心吸取上清轉移到新的管子內。整個過程要避光操作。注意：因JC-1不溶于水，很可能在稀釋到工作液的過程中形成聚集顆粒，則建議細胞染色前用離心或者過濾的方法去除這些顆粒后再使用。
2. JC-1染色步驟（流式細胞儀）
1）于6-，12或24-孔板上進行細胞鋪板，密度為5×105 cells/mL。37℃，5%CO2培養箱培養過夜。選擇合適的化合物根據特定的步驟進行凋亡誘導。 注：進行凋亡誘導時的細胞密度建議不超過1×106 cells/mL，也可根據自己的細胞類型培養至合適的密度。
2）取0.5 mL細胞懸液至無菌的離心管內；
3）室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。
4）用0.5 mL JC-1工作液重懸細胞，于37℃，5%CO2培養箱孵育15-30 min；注意：一般情況，15 min足以進行充分的染色。
5）室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清；
6）用2 mL細胞培養液或者緩沖液重懸細胞，之后室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清；
7）重復步驟6）；
8）用0.5 mL新鮮培養液或者緩沖液重懸細胞，即可進行后續的流式分析。注意：請馬上進行流式定量分析，此細節很重要。
數據分析：含有紅色JC-1聚集物的健康細胞線粒體用FL2通道檢測；含有綠色JC-1單體的凋亡或不健康細胞用FL1（FITC）通道檢測。
3. JC-1染色步驟（熒光顯微鏡）
A． 懸浮細胞
1）-6）同上JC-1染色步驟（流式細胞儀）；
7）用0.3 mL的緩沖液重懸細胞，即可進行熒光顯微鏡檢測。注意：請馬上進行熒光顯微分析，此細節重要。
數據分析：使用可同時檢測熒光素fluorescein/羅丹明或者熒光素fluorescein/Texas Red™的雙帶帶通濾波器進行檢測。未凋亡的活細胞因JC-1聚集后線粒體呈紅色，大發射波長為590 nm。凋亡和壞死細胞染料一直以單體形式存在，線粒體呈現綠色。大發射波長為530 nm。
B． 貼壁細胞
1）培養皿內用蓋玻片進行細胞爬片或者細胞培養在腔室玻片（chamber slide）上。選擇合適的化合物根據特定的步驟進行凋亡誘導。
2）染色前開始配制JC-1工作液，配制步驟見上。
3） 吸掉細胞培養液，然后加入足夠覆蓋所有細胞的JC-1工作液。于37℃，5%CO2培養箱孵育15-30 min；注意：一般情況，15 min足以進行充分的染色。
4）吸掉培養液，然后用合適的緩沖液來清洗細胞2次。
5）加入2 mL細胞培養液（培養液可含有血清和酚紅）或者PBS緩沖液，于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下觀察。數據分析同A. 懸浮細胞。
4. JC-1染色步驟（熒光酶標儀）
1）-7）同上JC-1染色步驟（流式細胞儀）；
9）用300 μL緩沖液重懸細胞；然后按照每孔100 μL的量將染色好的細胞轉移到黑色的96孔板內，即可進行熒光酶標板分析。注意：請馬上進行熒光顯微分析，此細節重要。
數據分析：健康細胞內，JC-1單體聚集形成聚合物，線粒體呈現強烈的紅色熒光（激發波長550 nm, 發射波長600 nm）。凋亡或壞死細胞內JC-1以單體形式存在，線粒體呈強烈的綠色熒光（激發波長485 nm, 發射波長535 nm）。然后計算紅色熒光信號與綠色熒光信號的比值，用來判斷細胞健康程度。
注意事項
1）JC-1是光敏感性的，所有染色步驟的操作過程中避免強光接觸。
2）JC-1染色完成后，立即進行后續的結果分析非常必要；
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
相關產品
JC-10線粒體膜電位熒光探針 | 40707ES03 | 1 mg |
JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒 | 40706ES60 | 100 T |
JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 | 40752ES60 | 100 T |
