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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50 μg |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 40775ES50 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
產品介紹
Indo-1, AM,Cell Permeable 細胞可滲透鈣離子熒光探針
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Indo-1, AM,Cell Permeable Indo-1, AM鈣離子熒光探針 | 40775ES50 | 50 μg | 248.00 |
Indo-1, AM,Cell Permeable Indo-1, AM鈣離子熒光探針 | 40775ES72 | 5×50 μg | 948.00 |
Indo-1, AM,Cell Permeable Indo-1, AM鈣離子熒光探針 | 40775ES80 | 1 mg | 1268.00 |
產品描述
Indo-1是一種細胞生物學常用的鈣離子熒光探針，與Fura-2為目前使用廣泛的比率法測定的鈣熒光指示劑，Indo-1能特異性地結合Ca2+，同時可發出熒光，結合Ca2+后的大發射波長從結合前的475 nm向400 nm（Ca2+飽和時）偏移，該信號變化可被流式細胞儀較好的捕捉：在氬離子激光器的351-364光譜范圍內單一波長激發該探針，在400 nm和475 nm的波長處分別檢測結合鈣離子和未結合鈣離子的熒光信號，通過二者熒光強度的比率測定鈣離子濃度。
由于Indo-1是極性大的酸性化合物，無法進入細胞內，為此在其負性基團上結合乙酰氧甲酯，使其成為Indo-1/AM，該變化既增加了酯溶性又消除了負電荷，極大的提高了細胞滲透性。在細胞內，Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可與胞漿游離Ca2+可逆性結合。
產品性質
CAS號（CAS NO.） | 112926-02-0 |
分子式（Formula） | C47H51N3O22 |
分子量（Molecular Weight） | 1009.91 |
Ex/Em | 346 nm/475 nm |
溶解性（Solubility） | 溶于DMSO |
結構式（Structure） |
|
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃避光干燥保存，有效期6個月。
注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
需要試劑準備
1） （可選）配制Pluronic F-127母液：100 mg Pluronic F-127粉末（Cat No. 60318ES60）中加入0.5 mL DMSO，配制成20%(w/v)的DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30 min。溶液室溫保存，不要冷藏。如果有結晶析出，可以重新加熱后溶解，不影響使用。
2）Hanks•balanced salt solution
使用方法（本實驗方案僅供參考，為得到實驗結果，需根據具體的實驗情況優化實驗條件。）
1）Indo-1/AM儲存液的配制
利用高質量無水DMSO溶解Indo-1/AM配制成2-5 mM的儲存液，該儲存液可分裝于-20℃避光干燥密封保存。每次使用前需回溫至室溫。
【注】：① 因為Indo-1/AM在水中的溶解性和穩定性較差，不可用水溶性緩沖液配制Indo-1/AM儲存液。
② 溶解用的DMSO需要保證新鮮無水，否則將會導致AM 體水解，使熒光染料無法進入細胞，影響實驗效果。
2）Indo-1/AM工作液的配制
利用合適緩沖液(如Hanks & Hepes )將Indo-1/AM稀釋成1-10 μM的工作液，具體稀釋方法如1 mM母液配制1 mL濃度為4 µM工作液，用1 ml 緩沖液稀釋4 µL 1 mM母液即可，混勻。
【注】：① 典型工作液濃度為0.1-5 μM，對于大多數細胞，我們推薦加載濃度4-5 μM，具體的使用濃度需根據實驗要求進行優化。為了避免過度加載造成細胞毒性，建議在取得有效結果的基礎上盡量使用低探針濃度。
② Indo-1/AM工作液需現配現用，避免反復凍存。
3）（可選）如果Indo-1/AM進入細胞的效果不好，可向 Indo-1/AM/DMSO 儲存液中加入適量20% Pluronic F127溶液，終稀釋至其終濃度為0.02-0.05%，Pluronic F127 可以防止 Indo-1/AM在緩沖液中聚合并能幫助其進入細胞。
【注】：Pluronic F127可降低Indo-1/AM的穩定性，因此只建議在配制工作液時加入，不建議將其加入儲存液長期保存。
4）取出預培養的細胞，除去培養基，使用緩沖液洗滌細胞3次。
【注】：如果使用含血清的培養基，血清中的酯酶會分解 AM 體，從而降低Indo-1/AM進入細胞的效果。另外含有酚紅的培養基會使本底值略微偏高，所以加工作液之前需盡量去除培養基殘留。
5）將 Indo-1/AM工作液加入細胞，加入量以覆蓋細胞為準。在37℃培養15-60 min，然后除去Indo-1/AM工作液。
【注】：關于孵育的時間，如果*做實驗不能確定，建議先孵育30 min，看熒光效果：如果細胞死亡較多，適當縮短時間；如果熒光強度太弱，適當延長時間。
6）用不含探針緩沖液洗滌細胞 3 次，以充分去除殘留的Indo-1/AM工作液。然后加入緩沖液覆蓋細胞。
7）37℃培養箱孵育約 20-30 min，以確保 AM 體在細胞內的*去酯化作用。
8）流式細胞儀檢測細胞。
【注】：① 某些細胞會將熒光探針被動運輸或分泌到胞外，在一些通過陰離子泵泄漏探針的細胞內該現象尤其嚴重，此時需加入一些抑制劑防止該情況的發生，如加入適量的丙磺舒或磺吡酮。但需注意，抑制劑的加入量必須經過優化，過量的抑制劑也會對細胞造成不利影響。
② 某些細胞具有自體熒光會影響結果分析，需使用未加載探針細胞做對照，在結果分析時在同一波長下扣除自熒光。
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