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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 20T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 40304ES20 | 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱
產品編號
規格
價格（元）
*（元）
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 檢測試劑盒
40304ES20
20 T
518.00
386.00
40304ES50
50 T
1120.00
786.00
40304ES60
100 T
1960.00
1346.00
產品描述
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 檢測試劑盒（Annexin V-Alexa Fluor647/PI Apoptosis Detection Kit）是用Alexa Fluor647標記了的Annexin V作為探針，來檢測細胞早期凋亡的發生，可用流式細胞儀或其他熒光檢測設備進行檢測。
其檢測原理為：在正常的活細胞中，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine，PS）位于細胞膜的內側，但在早期凋亡的細胞中，PS 從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中。Annexin V（膜聯蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力結合。可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。
另外，本試劑盒中還提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用來區分存活的早期細胞和壞死或晚期凋亡細胞。PI是一種核酸染料，它不能透過正常細胞或早期凋亡細胞的完整的細胞膜，但可以透過凋亡晚期和壞死細胞的細胞膜而使細胞核染紅。因此，將Annexin V與PI聯合使用時，PI 則被排除在活細胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡細胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡細胞和壞死細胞同時被Alexa Fluor647 和PI 結合染色呈現雙陽性（Annexin V+/PI+）。
本試劑盒需要使用流式細胞儀進行檢測。
產品組分組分編號
組分名稱
產品編號/規格
40304ES20（20T）
40304ES50（50T）
40304ES60（100T）
40304-A
Annexin V-Alexa Fluor647
100 μL
250 μL
500 μL
40304-B
PI Staining Solution (20 μg/mL)
200 μL
500 μL
1.0 mL
40304-C
1×Binding Buffer
10 mL
25 mL
50 mL
運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。-20 ℃避光保存，避免反復凍融，一年有效期。
【注】：如果需要在短時間內多次重復使用，可以在4 ℃避光保存，半年有效期。
注意事項
1、由于細胞凋亡是一個快速的過程，建議樣品在染色后1小時之內進行分析。
2、對于貼壁細胞，消化是一個關鍵步驟。貼壁細胞誘導細胞凋亡時如有漂浮細胞，需收集漂浮細胞和貼壁細胞后合并染色。處理貼壁細胞時要小心操作，盡量避免人為的損傷細胞。胰酶消化時間過短，細胞需要用力吹打才能脫落，容易造成細胞膜的損傷，PI攝入過多；消化時間過長，細胞膜同樣易造成損傷，甚至會影響細胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-Alexa Fluor647的結合。消化時將胰酶鋪滿孔板底后，輕搖時胰酶與細胞充分接觸，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段時間，待細胞間空隙增大，瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA，EDTA會影響Annexin V與PS的結合。
3、如果樣品來源于血液，請務必除去血液中的血小板。因為血小板含有PS，能與Annexin V結合，從而干擾實驗結果。可以使用含有EDTA的緩沖劑并在200 g離心洗去血小板。
4、試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
5、Annexin V-Alexa Fluor647和PI是光敏物質，在操作時請注意避光。
6、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
7、本產品僅作科研用途！
使用說明
1、 樣品染色
1.1、懸浮細胞：300 g，4℃離心5 min收集細胞。
貼壁細胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300 g，4℃離心5 min收集細胞。胰酶消化時間不宜過長，以防引起假陽性。1.2、用預冷的PBS洗滌細胞2次，每次均需300g，4℃離心5 min。
1.3、吸棄PBS，加入100 μL 1×Binding Buffer重懸細胞。
1.4、加入5μL Annexin V-Alexa Fluor 647和10 μL PI，輕輕混勻。
1.5、避光、室溫反應15 min。
1.6、加入400 μL 1×Binding Buffer，混勻后放置于冰上，樣品在1小時內用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測。
【注】：為了避免洗滌細胞時損失細胞，在吸液時可以用大的Tip頭套上小的Tip頭吸液。
2、流式細胞儀分析
Alexa Fluor647最大激發波長為651 nm，最大發射波長為667 nm；PI-DNA復合物的最大激發波長為535 nm，最大發射波長為615 nm。用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），Alexa Fluor647為橫坐標，PI為縱坐標。每個樣采集10,000 events。
HB220222
