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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50 T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 11145ES50 | 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit | 11145ES50 | 50 T | 1126.00 |
Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit | 11145ES70 | 200 T | 4126.00 |
產品描述
Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA為模板進行定量PCR反應的試劑盒。在實驗的過程中，逆轉錄和定量PCR在同一反應管中進行，簡化了實驗操作，降低了污染的風險。本試劑盒以RNA為模板，使用基因特異性引物，利用耐熱Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase高效合成第一鏈cDNA，并搭配使用探針和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase，配合優化的緩沖體系能夠特異靈敏的對RNA模板進行精確定量。
本試劑盒以預混的Mix形式提供，2×Hifair® Ⅲ P buffer包含優化的緩沖體系和dNTPs等，優化了有效抑制非特異性 PCR擴增的因子和提升PCR反應擴增效率的因子，適用于熒光標記探針的高特異性檢測系統。此外，Hifair® UH Ⅲ Enzymes包含比例優化的Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase、RNase inhibitor及UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase等。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產品編號/規格 | |
11145ES50 (50 T) | 11145ES70 (200 T) | ||
11145-A | 2×Hifair® Ⅲ P buffer | 500 μL | 2×1 mL |
11145-B | Hifair® UH Ⅲ Enzymes | 50 μL | 200 μL |
11145-C | Hieff® 50×High Rox | 20 μL | 80 μL |
11145-D | Hieff® 50×Low Rox | 20 μL | 80 μL |
11145-E | RNase free ddH2O | 500 μL | 2×1 mL |
【注】P buffer 為Probe buffer 的簡寫，UH 為UNICON-Hifair 的簡寫。
適用機型
High Rox 適用機型：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™
Low Rox 適用機型：ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™
不需要 Rox 校正的儀器型號：
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃避光保存，有效期1年。本品避免反復凍融。建議分裝保存。
注意事項
1. 實驗過程中請使用 RNase free 耗材。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
反應體系（以 20 μL為例）
組分 | 加入量 | 終濃度 |
2×Hifair® Ⅲ P buffer | 10 μL | 1× |
Hifair® UH Ⅲ Enzymes | 1 μL | - |
Hieff® 50×High Rox or Low Rox | 0.4 μL | - |
Gene Specific Primer Forward (10 µM) | 0.4 μL | 0.2 μM |
Gene Specific Primer Reverse (10 µM) | 0.4 μL | 0.2 μM |
TaqMan Probe (10 µM) | 0.2 μL | 0.1 μM |
模板 RNA | Total RNA: 1 pg-1 µg | - |
RNase free ddH2O | to 20 μL | - |
【注】: a 所有試劑使用前應充分混勻。
b 參比染料：Rox的添加，可根據不同儀器型號進行選擇，具體可參考【適用機型】。
c 引物濃度：通常引物終濃度為0.2 μM，也可以根據情況在0.1-1.0 μM之間進行調整。
d 探針濃度：探針終濃度可在50 nM-250 nM之間調整。
e 體系配制：請于超凈工作臺內配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
f 模板稀釋：一步法RT-qPCR靈敏度*，推薦將模板稀釋后(如稀釋至2-5 μL/樣本)加入反應體系中，這樣可以有效提高實驗的重復性。
g 反應體系：建議以大體系進行實驗，如20 μL或50 μL。
標準擴增程序
反應階段 | 溫度 | 時間 | 循環數 | |
1 | 逆轉錄 | 50℃a | 15 minb | 1 |
2 | 預變性 | 95℃ | 30 sec | 1 |
3 | 擴增反應 | 95℃ | 10 sec | 45 cycles |
60℃ | 30 secc |
【注】: a 對于含復雜二級結構或高GC含量的RNA模板，可將逆轉錄溫度提高到55℃，有助于提升擴增效率和靈敏度。
b 逆轉錄時間可以根據模板的復雜程度進行調整，時間為5min時可滿足大多數基因的鑒定。
c 不同的qPCR檢測儀器所需的熒光信號采集時間不同，請根據最短時間限制進行設置。
HB220304
