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產品簡介
產品介紹
Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP)
小牛腸堿性磷酸酶
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） |
Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) 小牛腸堿性磷酸酶 | 20427ES80 | 1000U | -20℃ | 936.00 |
產品描述
Alkaline Phosphatase，中文名堿性磷酸酶，可將DNA、RNA的5’端磷酸基團去除，常用于阻止載體的自連作用：在分子克隆實驗中，DNA連接酶催化DNA連接時需要有磷酸基團的存在，載體在經酶切后會在切點端保留一個磷酸基團。而載體經堿性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端無磷酸基團，因而不可以和自身3’ 端連接。因此連接反應中載體本身會優先發生的連接反應被阻止，提高了目的片段插入率。另外，堿性磷酸酶還可制備用于5’端標記的DNA模板，以及用于該酶蛋白的脫磷酸作用等。
本品為小牛腸來源的堿性磷酸酶，可以降解幾乎所有磷酸單酯，但是該酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 規格 |
20427-A | Alkaline Phosphatase (30 U/μl) | 1000U |
20427-B | 10×AP buffer | 1ml |
產品性質
來源（Source） | 攜帶小牛腸堿性磷酸酶表達質粒的酵母 |
質量控制（Quality Control） | 無核酸外切酶、核酸內切酶、核糖核酸酶污染 |
熱滅活（Thermal Inactivation） | 在螯合劑存在下，65℃加熱30min，99%活性不可逆喪失；使用苯酚，可使酶*失活。 |
儲存液條件（Storage conditions） | 10 mM Tris-HCl (pH8.0), 1 mM MgCl2, 50mM KCl, 0.1 mM ZnCl2, 50% glycerol. |
活性定義（Unit definition） | 在pH9.8, 37℃條件下，以對硝基苯酚磷酸鹽(p-nitrophenylphosphate)為底物，1分鐘生成1μmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的堿性磷酸酶量定義為1個活力單位。 |
zui合適pH（Optimal pH） | 該酶在底物濃度高的情況下其zui合適反應pH為10，在底物濃度低時，zui合適pH為8，此時該酶活性較高濃度底物時稍低。 |
優化體系（Optimal Buffer） | AP Buffer (500 mM Tris-HCl, pH9.0; 10 mM MgCl2) |
運輸和保存方法
干冰運輸。-20℃保存，本酶在保存條件下及其穩定。
注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1 DNA去磷酸化
① 在1.5ml離心管中加入下列試劑：
無菌ddH2O | Up to 50μl |
DNA-片段* | 1-20pmol |
Alkaline Phosphatase | 1-2μl |
10×AP buffer | 5μl |
【*】：單鏈DNA或含5’端突出末端的DNA推薦低溫下孵育，平末端DNA或含3’突出末端的DNA建議在較高溫度下孵育。
② 混勻上述試劑，于37℃或50℃孵育30min。或者37℃孵育15min后，再于50℃孵育15min。
2 酚氯方法抽提DNA
① 苯酚/氯方/異戊醇（25:24:1）抽提2次。
【注】：推薦在酚提取前將其在含5 mM EDTA, 0.5% SDS ,50 μg/ml Proteinase K的溶液中56℃孵育30min以*滅活堿性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10min，滅活效果更佳。
② 氯方/異戊醇（24:1）抽提。
3 乙醇沉淀DNA
① 加入2.5μl 3M NaCl(終濃度150mM).
② 加入125μl（2.5倍體積）預冷乙醇，混勻后于-20℃放置30-60min，沉淀DNA。
4 溶解DNA
離心，*去除乙醇后，將DNA溶于適量去離子水（＜20μl）。
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