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Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液

產品信息

產品描述

本品細胞/組織裂解液，WB/IP裂解液，是一種非變性條件下的裂解液，含有sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、sodium orthovanadate和leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解，并能維持原有的蛋白間的相互作用。裂解得到的蛋白樣品可用于常規的Western、IP和Co-IP等實驗。

運輸與保存方法

冰袋（wet ice）運輸。

-20℃保存，一年有效。盡量避免反復凍融，建議分裝后使用。

注意事項

1）需自備PMSF。

2）裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。

3） 用WB/IP裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定其蛋白濃度（YEASEN CAT NO.20201ES76）。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：

(一) 細胞樣品

1）融解WB/IP裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。

2）貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液清洗細胞一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。

懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成5×10⁵～1×10⁶個細胞/管，然后再裂解。因為大團的細胞較難裂解充分，而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。

3）充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入100μl裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150μl或200μl。

（二）組織樣品：

1）把組織|剪切成細小的碎片。

2）融解WB/IP裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。

3）按照每20mg組織加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)

4）用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5）充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6）如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得充分。

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