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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 60216ES60 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
鹽酸博萊霉素
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） |
鹽酸博萊霉素 | 60216ES60 | 100mg | -20°C避光保存 | 453.00 |
| 60216ES80 | 10×100 mg | -20°C避光保存 | 3353.00 |
產品描述
鹽酸博來霉素是博來霉素/腐草霉素抗生素家族的一個成員，是從Streptomyces verticillus中分離的水溶性、銅離子螯合糖蛋白抗生素，銅離子存在使得溶液呈藍色。這種銅離子螯合形式是沒有活性的，當抗生素進入細胞后，Cu2+被還原成Cu+，并被細胞中的巰基化合物除去。此時，鹽酸博來霉素才被活化并與DNA結合，對DNA進行切割，從而引起細胞死亡。而鹽酸博來霉素耐受基因（Sh ble）編碼的蛋白質可以與鹽酸博來霉素結合，并抑制鹽酸博來霉素切割DNA。鹽酸博來霉素作用譜非常廣，其對細菌，真菌（包括酵母菌）、植物和哺乳動物細胞都有很強的抗菌活性，因此鹽酸博來霉素常用作一種非常有效的工具抗生素，用來篩選攜帶Sh ble抗性基因并能穩定表達分子量為13.665 kDa的一種鹽酸博來霉素抗性蛋白的細胞株。
本產品為溶于高純度水的無菌溶液形式，濃度為100mg/ml，細胞培養級。
產品性質
CAS號（CAS NO.） | 11006-33-0 |
分子式（Formula） | C55H85O21N20S2Cu - HCl |
分子量（Molecular weight） | 1535 |
純度（Purity） | >90% by HPLC |
結構式（Structure） |
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運輸與保存方法
冰袋運輸。產品-20°C避光保存。避免反復凍存，有效期1年。
應用濃度
1. 大腸桿菌（E. coli）：25-50 µg/mL，用低鹽LB培養基篩選（NaCl濃度不能超過5 g/L)；
2. 酵母菌：50-300 µg/mL，用YPD或基本培養基（minimal medium）篩選；
3. 哺乳動物細胞：50-1000 µg/mL，根據細胞選擇合適的培養基。
操作步驟（哺乳動物細胞篩選）
【注】: 1. 鹽酸博來霉素用于篩選哺乳動物穩定轉染細胞的濃度范圍為50-1000 µg/mL，平均工作濃度范圍為250-400 µg/mL。影響篩選濃度的主要因素包括離子強度，細胞類型，細胞密度以及生長速率。以下步驟僅作參考，請根據自身實驗體系做適當調整。
2. 鹽酸博來霉素的殺滅機制不同于新生霉素（neomycin）和潮霉素（hygromycin），細胞不會聚集成團或從培養板表面脫落。一旦接觸到鹽酸博來霉素，敏感細胞會出現如下的形態變化：1）細胞體積明顯增加（類似于巨細胞病毒感染容納性細胞引起的腫大效應）；2）異常的細胞形狀包括細胞長臂（long appendages）出現；3）胞漿內出現大型空泡（源于內質網、高爾基體或支撐蛋白的破裂）；4）質膜和核膜破裂，導致膜上出現許多孔。這些敏感細胞zui終會*破損，僅以細胞碎片的形式存在。
3. 鹽酸博來霉素抗性細胞繼續正常生長，長成不同于敏感細胞的克隆。形態上，其與未接觸鹽酸博來霉素的正常細胞沒有差異。
一．建立殺滅曲線
1. 重新鋪板或者將滿盤細胞重新分盤，使得細胞密度約25%，按照8個平板/組準備，培養24 h。
2. 去除舊培養基。加入含不同濃度鹽酸博來霉素的篩選用培養基，鹽酸博來霉素濃度可設置為0，50，100，200，400，600，800和1000 μg/mL，每個濃度做3個平行；也可根據自身實驗體系，設置不同的濃度梯度。
3. 每3-4天更換新鮮的篩選培養基，并觀察存活細胞的比例。選擇在合適的時間（1-2周內）殺死大多數細胞的濃度為*工作濃度。
【注】：若是難以在顯微觀察下區分活細胞，也可用臺盼藍染色來計算存活細胞的數量，以確定鹽酸博來霉素的zui適濃度。
二．篩選穩定轉染細胞
1. 轉染細胞，用100 mm培養皿進行培養。以未轉染的細胞作為陰性對照。
2. 轉染后，用預熱的1× PBS洗滌一次，加入新鮮培養基。
3. 轉染48-72 h后，用含有*濃度鹽酸博來霉素（由滅殺曲線確定）的新鮮培養基篩選細胞。為了更好的鑒定和篩選細胞集落，建議將細胞按比例稀釋成一系列濃度。
【注】：若待篩選細胞對鹽酸博來霉素的抗性明顯強于大部分細胞，或者細胞快速分裂導致低濃度情況鹽酸博來霉素的篩選效果不明顯，按照以下方法克服此類耐性：a）將細胞直接用含鹽酸博來霉素的篩選培養基進行分盤；b）37°C孵育2-3 h直至細胞貼壁；c）從培養箱內取出細胞并于4°C放置2 h，一定要確保培養基內含有HEPES。【此步的目的在于短時間內終止細胞分裂活動，從而允許鹽酸博來霉素抗性得以發揮，殺死細胞。】d）細胞重新放回37°C培養箱內培養。
4. 每3-4天加入選擇培養基，直到出現細胞集落。
5. 挑選并轉移克隆到96或48孔板中。在進行更大孔徑培養板或培養皿上擴大培養之前，確保培養細胞密度近100%。
三、維持培養穩定轉染細胞
可采取以下方式維持培養穩定轉染細胞，1）使用含相同劑量鹽酸博來霉素的篩選培養基來維持培養；2）降低鹽酸博來霉素劑量為原來的一半進行維持培養；3）使用正好能預防敏感細胞生長但不足以致死的鹽酸博來霉素劑量來維持培養【參考殺滅曲線】。
注意事項
1. 本品具有一定的光敏感型，操作與培養過程盡量暗處進行。產品保存盡量避光。
2. 本品有毒害，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
HB170523
