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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 40304ES20 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業,制藥 |
產品介紹
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI細胞凋亡檢測試劑盒
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） |
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 凋亡檢測試劑盒 | 40304ES20 | 20T | 4℃ | 518.00 |
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 凋亡檢測試劑盒 | 40304ES50 | 50T | 4℃ | 1120.00 |
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 凋亡檢測試劑盒 | 40304ES60 | 100T | 4℃ | 1960.00 |
產品描述
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI細胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit）是用Alexa Fluor 647標記了的Annexin V作為探針，來檢測細胞早期凋亡的發生，可用流式細胞儀或其他熒光檢測設備進行檢測。
其檢測原理為：在正常的活細胞中，磷脂酰絲-氨酸（phosphotidylserine，PS）位于細胞膜的內側，但在早期凋亡的細胞中，PS 從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中。Annexin-Ⅴ（膜聯蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力結合。可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲-氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。
另外，本試劑盒中還提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用來區分存活的早期細胞和壞死或晚期凋亡細胞。PI是一種核酸染料，它不能透過正常細胞或早期凋亡細胞的完整的細胞膜，但可以透過凋亡晚期和壞死細胞的細胞膜而使細胞核染紅。因此，將Annexin V與PI聯合使用時，PI 則被排除在活細胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡細胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡細胞和壞死細胞同時被Alexa Fluor 647 和PI 結合染色呈現雙陽性（Annexin V+/PI+）。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | ||
40304ES20（20T） | 40304ES50（50T） | 40304ES60（100T） | ||
40304-A | Annexin V-Alexa Fluor 647 | 100 μl | 250 μl | 500 μl |
40304-B | PI Staining Solution (20 μg/ml) | 200 μl | 500 μl | 1.0 ml |
40304-C | 4×Binding Buffer | 4 ml | 10 ml | 20 ml |
運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。本試劑盒中所有組分均在4℃保存，Annexin V-Alexa Fluor 647、PI需避光保存。
使用說明
1.1 樣品染色
a) 懸浮細胞：300g，4℃離心5 min收集細胞。
b) 貼壁細胞：用不含EDTA的胰-酶消化后，300g，4℃離心5 min收集細胞。胰-酶消化時間不宜過長，以防引起假陽性。
配制1×Binding Buffer：用去離子水按1:4 稀釋4×Binding Buffer（4ml 結合緩沖液+12ml 去離子水）。
用預冷的PBS洗滌細胞2次，每次均需300g，4℃離心5 min。
加入250 μl 1×Binding Buffer重懸細胞，調節其濃度為1×106/ml。
取100 μl細胞懸液于5ml流式管中，加入5μl Annexin V-Alexa Fluor 647和10 μl PI，輕輕混勻。
避光、室溫反應15 min。
加入400 μl PBS，混勻，樣品在1小時內用流式細胞儀檢測。
注意：為了避免洗滌細胞時損失細胞，在吸液時可以用大的Tip頭套上小的Tip頭吸液。
1.2 流式細胞儀分析
Alexa Fluor 647zui大激發波長為651 nm，zui大發射波長為667 nm；PI-DNA復合物的zui大激發波長為535 nm，zui大發射波長為615 nm。用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），Alexa Fluor 647為橫坐標，PI為縱坐標。每個樣采集10，000 events。
注意事項
由于細胞凋亡是一個快速的過程，建議樣品在染色后1小時之內進行分析。
對于貼壁細胞，消化是一個關鍵步驟。貼壁細胞誘導細胞凋亡時如有漂浮細胞，需收集漂浮細胞和貼壁細胞后合并染色。處理貼壁細胞時要小心操作，盡量避免人為的損傷細胞。胰-酶消化時間過短，細胞需要用力吹打才能脫落，容易造成細胞膜的損傷，PI攝入過多；消化時間過長，細胞膜同樣易造成損傷，甚至會影響細胞膜上磷脂酰絲-氨酸與Annexin V-Alexa Fluor 647的結合。消化時將胰-酶鋪滿孔板底后，輕搖時胰-酶與細胞充分接觸，然后倒掉大部分胰-酶，利用剩余的少量胰-酶再消化一段時間，待細胞間空隙增大，瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA，EDTA會影響Annexin V與PS的結合。
如果樣品來源于血液，請務必除去血液中的血小板。因為血小板含有PS，能與Annexin V結合，從而干擾實驗結果。可以使用含有EDTA的緩沖劑并在200 g離心洗去血小板。
試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
Annexin V-Alexa Fluor 647和PI是光敏物質，在操作時請注意避光。
