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凋亡早期檢測
——Annexin-V呈現檢測結果
一 背景介紹
細胞凋亡（Apoptosis）一般是指機體細胞在發育過程中或在某些因素作用下通過細胞內基因及其產物的調控而發生的一種程序性細胞死亡過程。 細胞凋亡途徑中各事件的發生是有時序性的，即各事件按先后順序依次發生，zui終導致凋亡小體的出現，細胞隨后發生凋亡。
凋亡早期
在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（Phosphotidylserine, PS）位于細胞膜內側，但在早期凋亡的細胞中，PS由細胞膜的內側翻轉到細胞膜表面，暴露在細胞外環境中。Annexin-Ⅴ（膜聯蛋白-V）是一種分子量為35-36 kDa的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力結合，通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。
檢測方法：用熒光素（FITC、Alexa Fluor488等）標記的 Annexin-V 作為探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。另外，碘化丙啶（propidine iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI 能夠透過細胞膜而使細胞核紅染。因此將 Annexin-V 與 PI 匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區分開來。
使用反饋
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客戶來源：中山大學 細胞類型：MGC803 cells 所用試劑盒：Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit （Yeasen #40302）
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引自：Zhou, T., et al., Mild hypothermia protects against oxygen glucose deprivation/reoxygenation-induced apoptosis via the Wnt/beta-catenin signaling pathway in hippocampal neurons. Biochem Biophys Res Commun, 2017. 486(4): p. 1005-1013. | |
熒光補償的調節：
Q：光補償調節的原則？
A: 1）用于調節補償的樣本必須單染。
2）用來調節補償的熒光素必須與實驗用的熒光素一樣（例如不能用FITC調節EGFP的補償）。
2）橫平豎直：理論上X-Mean或者Y-Mean要相等（如下圖所示），但在實際操作中，只需要保證單染的細胞不跨區存在。
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Q：如何進行光補償的調節？
A：進行熒光補償的調節，需要設置幾組對照實驗。以AnnxinV-FITC/PI雙染試劑盒為例；
1）空白對照組：不進行任何標記的細胞，用于電壓的調節，調整前向散射和側向散射，得到清晰劃分的細胞群體。
2）凋亡誘導的單染組：陽性對照的細胞群體需要超過分析的細胞群體的10%，用于調節補償。
3）雙染實驗組：利用空白對照組和單染組調節好的參數進行實驗數據的獲得。
訂購信息：
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒 | 40302ES20/50/60 | 20T/50T/100 T | 480/960/1680 |
Annexin V-EGFP/PI 細胞凋亡檢測試劑盒 | 40303ES20/50/60 | 20T/50T/100 T | 480/960/1680 |
Annexin V-Alexa Fluor647/PI 凋亡檢測試劑盒 | 40304ES20/50/60 | 20T/50T/100 T | 518/1120/1960 |
Annexin V-Alexa Fluor488/PI 凋亡檢測試劑盒 | 40305ES20/50/60 | 20T/50T/100 T | 518/1120/1960 |
Annexin V-APC/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒 | 40309ES20/50/60 | 20T/50T/100 T | 989/1849/2949 |
Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒 | 40310ES20/50/60 | 20T/50T/100 T | 480/960/1680 |
三 常見問題與解答
Q：Annexin V/ PI 試劑盒能否檢測除人以外其他動物細胞凋亡情況？
A：可以。因為Annexin V 是與磷脂酰絲氨酸（PS）的結合，而PS不存在種屬間差異。
Q：使用Annexin V/ PI 試劑盒進行凋亡檢測，用含EDTA 的胰酶消化細胞對結果有影響嗎？
A：會。因為Annexin V 是Ca2+ 依賴的蛋白，EDTA會 螯合Ca2+從而影響Annexin V與PS 的結合，進而影響實驗結果。
Q：如果細胞自帶GFP蛋白，請問哪種凋亡檢測試劑盒適用該細胞的凋亡檢測？
A：選用PE標記或者APC標記的Annexin V凋亡檢測試劑。
Q：對于來自血液的細胞樣品，為什么去除血液中的血小板？
A：因為血小板中含有PS，其能與Annexin V結合進而干擾實驗結果。
Q：Annexin -V 在實驗操作上應注意哪些事項？
A：由于Annexin -V上帶有熒光基團，實驗上應盡量避光操作和孵育；為保證實驗結果的正確性應在染色后1h內上機檢測。
四 部分使用客戶已發表文章
[1] Fluorescent carbon dots as an efficient siRNA nanocarrier for its interference therapy in gastric cancer cells. Journal of Nanobiotechnology, 2014,12(1):58. IF=4.946
[2] Insights into the Distinguishing Stress-induced Cytotoxicity of Chiral Gold Nanoclusters and the Relationship with GSTP1. Theranostics , 2015,5(2):134-149. IF=8.712
[3] Tobacco Mosaic Virus-Based 1D Nanorod-Drug Carrier via the Integrin-Mediated Endocytosis Pathway. Acs Applied Materials & Interfaces,2016,8(17):10800. IF=7.504
[4] Decreased proliferative, migrative and neuro-differentiative potential of postnatal rat enteric neural crest-derived cells during culture in vitro. Experimental Cell Research, 2016,343(2):218. IF=3.546
[5] Phenylethanoid Glycosides from Cistanche tubulosa Inhibits the Growth of B16-F10 Cells both in Vitro and in Vivo by Induction of Apoptosis via Mitochondria-dependent Pathway. Journal of Cancer,2016,7(13):1877-1887. IF=2.916
[6] A New Ligustrazine Derivative-Selective Cytotoxicity by Suppression of NF-κB/p65 and COX-2 Expression on Human Hepatoma Cells. Part 3. International Journal of Molecular Sciences, 2015,16(7):16401-16413. IF=3.226
[7] LncRNA-N1LR Enhances Neuroprotection Against Ischemic Stroke Probably by Inhibiting p53Phosphorylation. Molecular Neurobiology,2016:1-16. IF=6.19
[8] Glycyrrhiza uralensis water extract enhances dendritic cell maturation and antitumor efficacy of HPV dendritic cell-based vaccine. Scientific Reports ,2017,7:43796. IF=4.2590
[9] Targeting heat-shock protein 90 with ganetespib for molecularly targeted therapy of gastric cancer.Cell Death & Disease ,2015, 6(1):1595. IF=5.965
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HB170728
