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關鍵詞：SBI，Exosome，囊泡，膜性小囊泡，Exosome抽提，Exosome免疫純化，Exosome抗體，Exosome RNA
Exosome研究專題Exosome Research
Exosome是由多種活細胞分泌的50-100nm的膜性小囊泡，來源于晚期核內體（也成為多囊泡體）的囊泡，是由細胞內多泡體（MVBs）出芽形成，再與細胞膜融合后釋放到細胞外基質中。幾乎所有類型的細胞都能分泌，廣泛存在于各種體液中。不同細胞來源的Exosome所含有的具體成分不盡相同，根據分泌的細胞類型不同，在血液、尿液、羊水、惡性腫瘤、腹水等動物體液中的Exosome通常含有特定的miRNA和蛋白質，因此，Exosome為研究潛在的各種biomarker提供了很好的生物學材料。
Exosome參與調控重要的細胞生理活動，在免疫應答、凋亡、血管生成、炎癥反應、凝結過程中的作用均有報道，可以成為多種疾病的早期診斷標記物，也能作為靶向藥物的載體進行疾病治療。作為囊泡的一種，Exosome受到越來越多的關注。2013年諾貝爾獎揭曉，美國、德國3位科學家James E. Rothman, Randy W. Schekman和Thomas C. Sudhof因“發現細胞內的主要運輸系統-囊泡運輸的調節機制"，榮獲2013年諾貝爾生理學或醫學獎。這一獎項的授予，無疑將囊泡的研究推向了新的高潮。
一、Exosome抽提
SBI公司研究和開發了一款基于多聚體形式的Exosome提取試劑，能夠快速有效地提取及分離血清和腫瘤組織樣本中的Exosome囊泡。這些多聚體能夠形成類似于網狀結構，從而將60-180nm直徑的微泡分離出來。其純度和產量皆優于上述傳統方法。
（一）基于血清和血漿樣本
貨號 | 產品 | 規格 | 價格（元） |
EXOQ-1 | ExoQuickexosome precipitation solution | 5ml(75T) | 4203.2 |
EXOQ20A-1 | ExoQuickexosome precipitation solution | 20ml(300T) | 13561 |
產品特點
- 無需費時費力地超速離心；
- 比起昂貴的磁珠抗體或色譜柱更便宜；
- 適用于任何種屬來源的生物液體；
- 保持 exosome完好的生物活性；
- 富集更多的exosome；
- 省時，只需一個小時完成；
- zui少可從100μL的血清或5ml細胞培養上清/尿液中分離
產品操作步驟（僅作參考，以說明書為準）
- 收集生物液體，并于3000g離心15分鐘去除細胞或細胞碎片；
- 將上清轉移至另一干凈的滅菌管中，加入適量的ExoQuick試劑（體積配比見下表）；
孵育時間 | 樣本 | 樣本體積 | ExoQuick體積 |
30分鐘 | 血清 | 250ul | 63ul |
4℃一個晚上（12小時） | 生物液體 | 250ul | 63ul |
- 上下顛倒離心管，混勻；
注意：如果是血漿樣本，可能會因為纖維蛋白或者其他纖維蛋白原，造成沉淀。對于血漿樣本，請參考：
Pacific Hemostasis? Thromboplatin D (Thermo Cat#10-0356)
- 使用1/2體積的凝血活素D與血漿樣本充分混勻；
- 37℃孵育15min；
- 10,000rpm室溫離心5min；
- 保存上清，即“血清樣"液體，去除沉淀；
- 按照100ul上清：25ul ExoQuick試劑的比例混勻。
以下步驟相同。
- 4℃孵育一個晚上（至少12小時）或者30min（血清樣本）；
- 室溫或4℃ 1500g離心30min，管底可見沉淀；
- 去除上清；
- 1500g繼續離心5min，小心去除上層的液體組分；
- 加入1/10原始體積的無菌水或無核酸酶水，重懸沉淀。若沉淀難以溶解，可酌量加上直至*溶解。
（二）基于細胞培養上清、組織、尿液樣本
貨號 | 產品 | 規格 | 價格（元） |
EXOTC10A-1 | ExoQuick TC exosome precipitation solution | 10ml(10T) | 4189 |
EXOTC50A-1 | ExoQuick TC exosome precipitation solution | 50ml(50T) | 14072 |
注：常溫或藍冰運輸。
產品操作步驟（僅作參考，以說明書為準）
1.收集生物液體，并于3000g離心15分鐘去除細胞或細胞碎片；
2.將上清轉移至另一干凈的滅菌管中，加入適量的ExoQuick TC試劑（體積配比見下表）；
孵育時間 | 樣本 | 樣本體積 | ExoQuick TC體積 |
一個晚上（12小時） | 尿液 | 5ml | 1ml |
4℃一個晚上（12小時） | 細胞培養上清 | 5ml | 1ml |
3.上下顛倒離心管，混勻；
4.4℃孵育一個晚上（至少12小時）；
5.室溫或4℃ 1500g離心30min，管底可見沉淀；
6.去除上清；
7.1500g繼續離心5min，小心去除上層的液體組分；
8.用100-500ul buffer重懸沉淀（所用buffer根據下游的蛋白分析或RNA分析來定）。
（三）Exosome抽提輔助試劑
1.ExoQuick-LP脂蛋白預處理試劑盒
人類血漿包含著一些微球、外泌體、凋亡小體和脂蛋白顆粒的混合物，為了研究血清或血漿中的exosome所包含的miRNA和蛋白，必須在提取exosome之前盡量去除其它一些顆粒，特別是脂蛋白顆粒。的研究表明，高密度脂蛋白和低密度脂蛋白中均包含有miRNA。為了避免在對exosome中miRNA研究中引起假陽性結果，必須盡量去除血清或血漿中的脂蛋白。SBI為您提供ExoQuick-LP試劑盒，有效去除樣本中的脂蛋白，并提取血清或血漿中的Exosome。
貨號 | 產品 | 規格 | 價格（元） |
EXOLP-1 | ExoQuick-LP Lipoprotein PreClear&Exosome Precipitation Kit | 10T | 5751 |
運輸和保存
ExoQuick-LP試劑盒由藍冰或常溫運輸，收到產品后保存在4℃。
2.凝血酶素D試劑
為了避免血漿中的纖維蛋白造成exosome提取過程中的沉淀，因此要用凝血酶素D試劑預先去除血漿中的纖維蛋白，從而便于exosome的提取與研究。
貨號 | 產品 | 規格 | 價格（元） |
TMEXO-1 | Thrombin Plasma prep for Exosome Precipitation | 100T | 6347.4 |
EXOQ5TM-1 | ExoQuick Plasma prep and Exosome Precipitation Kit | 75T | 9471.4 |
運輸與保存
TMEXO-1試劑盒由藍冰或常溫運輸，收到產品后保存在4℃。
二、 Exosome免疫純化與分選
（一）FACS磁珠分選Exosomes
由于Exosomes體積太小而無法直接用于流式細胞分析，SBI為您推薦Exo-Flow抗體磁珠試劑盒，該試劑盒能夠捕獲Exosome特定的表面標記蛋白，利用流式分選技術，從而分離出不同亞型的Exosome。
試劑盒中提供的9.1μM直徑的Exo-Flow磁珠與傳統的4μM Dynabeads磁珠相比，能夠更好地捕獲Exosome，特別適用于數量較少的Exosome樣本。
常見的Exosome表面marker
Marker Type | Functions | Examples |
Tetraspanins | Exosome formation and secretion | CD9, CD63, CD81 |
Targeting/Adhesion | Exosome maturation and target cell binding | Integrins, ICAM-1, CD31, CD44 |
Antigen Presentation | Immune modulation, anergy and priming | MHC I/II, HLA-G |
Membrane transport and fusion | Exosome biogenesis, secretion and downstream cell fusion | SNAP, Annexins, Rab5b |
產品特點
- 表面積大，磁珠捕獲能力增強；
- 選擇性捕獲和純化Exosome；
- 多種標記抗體供選擇；
- FITC標記的流式應用；
- 可自由配備標記抗體。
試劑盒組分（10次反應）
Streptavidin Magnetic Beads, 9.1 μm | 200 mL at 10 mg/mL |
Biotinylated capture antibody, 100 ng/mL in PBS (multiple varieties) | 100 mL |
Bead Wash buffer | 60 mL |
Exosome Stain Buffer | 3 mL |
Exo-FITC Universal exosome stain | 100 mL |
Exosome Elution Buffer | 3 mL |
Magnetic stand (optional, cat# EXOFLOW700A-1) | 1 Stand |
產品信息
貨號 | 名稱 | 規格 | 價格（元） |
EXOFLOW100A-1 | CD9 Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD9-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) | 10 reactions | 5736.8 |
EXOFLOW150A-1 | TetraspaninExo-Flow combo capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD9, CD63, and CD81-biotin capture antibodies, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) | 10 reactions | 8718.8 |
EXOFLOW200A-1 | CD31 Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD31-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) | 10 reactions | 5736.8 |
EXOFLOW210A-1 | CD44 Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD44-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) | 10 reactions | 5736.8 |
EXOFLOW300A-1 | CD63 Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD63-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) | 10 reactions | 5736.8 |
EXOFLOW400A-1 | CD81 Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD81-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) | 10 reactions | 5736.8 |
EXOFLOW500A-1 | Rab5b Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, Rab5b-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) | 10 reactions | 5736.8 |
EXOFLOW600A-1 | HLA-G Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, HLA-G-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) | 10 reactions | 5736.8 |
EXOFLOW610A-1 | CD14 Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD14-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) | 10 reactions | 5736.8 |
EXOFLOW620A-1 | CD68 Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD68-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) | 10 reactions | 5736.8 |
EXOFLOW630A-1 | EpCAMExo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, EpCAM-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) | 10 reactions | 5736.8 |
EXOFLOW650A-1 | Alpha-2-Macroglobulin (A2M) Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, A2M-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) | 10 reactions | 5736.8 |
EXOFLOW700A-1 | Exo-Flow Multifunctional Magnetic Stand | 1 Kit | 3947.6 |
EXOFLOW800A-1 | Exo-FITC Exosome FACS stain | 20 reactions | 2158.4 |
EXOFLOW810A-1 | Exo-APC Exosome FACS stain | 20 reactions | 2158.4 |
CSFLOWBASICA-1 | Basic Exo-Flow kit without any coupled antibodies (Uncoupled magnetic streptavidin beads, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain) | 100 reactions | 9869 |
（二）IP高通量沉淀血清Exosomes
Exo-Flow 96/32 IP試劑盒可從血漿樣本、使用ExoQuick-TC或超速離心富集的細胞培養上清（尿液、腦脊髓液等）exosomes產物樣本中高通量、直接免疫沉淀exosomes。
試劑盒中的磁珠已經預結合了CD9、CD63或者CD81用于選擇性捕獲特定的exosomes亞型，直接將上述樣本添加入磁珠中即可免疫沉淀exosomes。96孔板或32孔板形式產品可用于同時處理多個樣本。得到exosomes具有完整形態，可用于下游exosomes RNA和蛋白分析。
三、Exosome驗證分析
SBI ExoELISA產品線提供exosome常見的標記蛋白CD63、CD9、CD81和Hsp70抗體，這4種抗體也可以以試劑盒的形式提供（Western blot sampler kit (Catalog# EXOAB-KIT-1)）和ELISA試劑盒。
（一）Exosome抗體（Western Blot分析）
貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格（元） |
EXOAB-CD63A-1 | Anti-CD63 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat, horse) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody | 25 ul | 1902.8 |
EXOAB-CD81A-1 | Anti-CD81 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody | 25 ul | 1902.8 |
EXOAB-CD9A-1 | Anti-CD9 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody | 25 ul | 1902.8 |
EXOAB-Hsp70A-1 | Anti-Hsp70 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody | 25 ul | 1902.8 |
EXOAB-CETP-1 | Anti-CETP Antibody (polyclonal rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody | 25 ul | 1902.8 |
EXOAB-KIT-1 | ExoAb Antibody Kit (CD9, CD63, CD81, Hsp70 antibodies, rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody | 25 ul each | 6475.2 |
EXOAB-FLOT1-1 | Anti-FLOT1 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody | 25 ul | 1902.8 |
EXOAB-EPCAM1-1 | Anti-EpCam Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody | 25 ul | 1902.8 |
EXOAB-TSG101-1 | Anti-TSG101 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody | 25 ul | 1902.8 |
EXOAB-CXCR4-1 | Anti-CXCR4 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody | 25 ul | 1902.8 |
EXOAB-VMTN-1 | Anti-Vimentin Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody | 25 ul | 1902.8 |
EXOAB-ALIX-1 | Anti-ALIX Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody | 25 ul | 1902.8 |
EXOAB-ANXA5-1 | Anti-ANXA5 Antibody (rabbit anti-human, mouse, rat) with goat anti-rabbit HRP secondary antibody | 25 ul | 1902.8 |
Exosome抗體運輸與保存：藍冰運輸，收到產品后4℃保存，長期保存可置于-20℃.收到產品后有效期為6個月以上。
（二）ELISA定量分析
貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格（元） |
EXOEL-CD63A-1 | Exosome ELISA Complete Kit (CD63 detection) | 96 reactions | 8378 |
EXOEL-CD81A-1 | Exosome ELISA Complete Kit (CD81 detection) | 96 reactions | 8378 |
EXOEL-CD9A-1 | Exosome ELISA Complete Kit (CD9 detection) | 96 reactions | 8378 |
EXOCET96A-1 | EXOCET Exosome Quantitation Kit | 96 reactions | 5609 |
EXOAB-POS-1 | Human Exosome lysate positive protein control (10ug/ul) | 50 ul | 3436.4 |
EXOEL-BB-20 | Exosome binding buffer for ELISAs | 20 ml | 1902.8 |
產品特點
? 3種Exosome表面特殊蛋白檢測試劑盒供選擇：CD63，CD9，CD81；
? 間接ELISA法，信號經過兩步放大，靈敏度大大提高；
? 適用于所有類型細胞分泌的Exosome；
? 可檢測任何分離方法得到的Exosome。
運輸與保存：試劑盒由藍冰運輸，4℃保存，其中，ExoELISA蛋白標準品需保存在-20℃，建議蛋白樣本分裝，以避免反復凍融。有效期為收到產品后6個月。
四、Exosome功能研究
（一）熒光標記Exosome
SBI新產品Exo-Glow試劑盒，能夠熒光標記內源的Exosome RNAs為紅色，標記內部Exosome蛋白為綠色，從而達到使用熒光顯微鏡實時追蹤Exosome細胞內相互作用和物質運輸。
貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格 |
EXOR100A-1 | Exo-Red exosome RNA fluorescent label | 20 rxns | 4047 |
EXOG200A-1 | Exo-Green exosome protein fluorescent label | 20 rxns | 4047 |
EXOC300A-1 | Exo-Red + Exo-Green exosome cargo fluorescent label Combo Pack (10 rxns of each label) | 20 rxns | 4615 |
（二）利用Cyto-Trace讓細胞分泌帶有熒光的Exosome
四次跨膜蛋白CD9、CD63和CD81蛋白為Exosomes常見的生物標記蛋白。通過CD63和CD9 Cyto-Trace質粒，可以讓您研究的靶細胞分泌帶有綠色或者紅色熒光的Exosomes，以便下游功能性運輸研究。
貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格 |
CYTO120-PA-1 | pCT-CD63-GFP (pCMV, Exosome/Secretory, CD63 Tetraspanin Tag) | 10ug | 7540.2 |
CYTO120R-PA-1 | pCT-CD63-RFP (pCMV, Exosome/Secretory, CD63 Tetraspanin Tag) | 10 ug | 7540.2 |
CYTO122-PA-1 | pCT-CD9-GFP (pCMV, Exosome/Secretory, CD9 Tetraspanin Tag) | 10 ug | 7540.2 |
CYTO123-PA-1 | pCT-CD9-RFP (pCMV, Exosome/Secretory, CD9 Tetraspanin Tag) | 10 ug | 7540.2 |
CYTO124-PA-1 | pCT-CD81-GFP (pCMV, Exosome/Secretory, CD81 Tetraspanin Tag) | 10 ug | 7540.2 |
CYTO125-PA-1 | pCT-CD81-RFP (pCMV, Exosome/Secretory, CD81 Tetraspanin Tag) | 10 ug | 7540.2 |
（三）Exosome轉染試劑
新型核酸轉染試劑Exo-Fect，可以將核酸直接轉染至分離得到的Exosome中。轉染的si/miRNA，mRNA，甚至質粒DNA，可以通過轉染的Exosome進入靶細胞。
只需要將目的核酸與Exo-Fect轉染試劑、分離到的Exosome簡單混合，就能形成Exosome核酸運載復合體。整個轉染過程檢測，不到1小時即可完成核酸轉染入Exosome過程。
貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格 |
EXFT10A-1 | Exo-FectExosome Transfection Kit | 10 reactions | 2769 |
EXFT20A-1 | Exo-FectExosome Transfection Kit | 20 reactions | 4970 |
五、Exosome RNA全面研究
Exosome RNA提取試劑盒專為exosome RNA抽提設計，的富集microRNA和其他小片段RNA。分別針對血液樣本和體液樣本設計兩款RNA提取試劑盒，特異性更高，適用所有類型細胞分泌的，以及任何分離方法得到的exosome RNA提取。操作簡單、方便，1h完成血清exosome RNA提取，無需苯酚/氯仿抽提。
純化的exosome RNA可以做進一步的microRNA篩選、芯片或二代測序等下游分析。但是由于exosome RNA含量總體水平偏低，因此需在進行下游分析之前進行exosome RNA的預擴增。
貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格 | |
RA800A-1 | Complete SeraMirExosome RNA Amplification kit (5ml ExoQuick, 20 exoRNA columns, cDNA synthesis and amplification components) | 20 reactions | 10280.8 | |
RA800TC-1 | Complete SeraMirExosome RNA Amplification kit from Media and Urine (10ml ExoQuick-TC, 10 exoRNA columns, cDNA synthesis and amplification components) | 10 preps | 7227.8 | |
RA806TC-1 | SeraMirExosome RNA Purification only kit for Media and Urine (10ml ExoQuick-TC and 10 exoRNA columns) | 10 preps | 6006.6 | |
RA808A-1 | SeraMirExosome RNA Purification Column kit (20 exoRNA columns) | 20 preps | 4189 | |
RA810A-1 | Human SeraMirExosome RNA 384 microRNA qPCR Profiler Assay Set | 20 profiles | 14824.8 | |
RA820A-1 | Human Complete SeraMirExosome RNA Amplification and Profiling Kit (contains cat# RA800A-1, RA80-1, RA810A-1 components) | 20 profiles | 14824.8 | |
RA820TC-1 | Human Complete SeraMirExosome RNA Amplification and Profiling Kit for Media and Urine (contains cat# RA800TC-1 with 50ml ExoQuick-TC, RA80-1 and RA810A-1 components) | 20 profiles | 18644.6 | |
RA811A-1 | Mouse SeraMirExosome RNA 384 microRNA qPCR Profiler Assay Set | 20 profiles | 5708.4 | |
RA821A-1 | Mouse Complete SeraMirExosome RNA Amplification and Profiling Kit (contains cat# RA800A-1, RA80-1, RA811A-1 components) | 20 profiles | 14824.8 | |
RA821TC-1 | Mouse Complete SeraMirExosome RNA Amplification and Profiling Kit for Media and Urine (contains cat# RA800TC-1 with 50ml ExoQuick-TC, RA80-1 and RA811A-1 components) | 20 profiles | 18644.6 | |
RA812A-1 | Rat SeraMirExosome RNA 384 microRNA qPCR Profiler Assay Set | 20 profiles | 5708.4 | |
RA822A-1 | Rat Complete SeraMirExosome RNA Amplification and Profiling Kit (contains cat# RA800A-1, RA80-1, RA812A-1 components) | 20 profiles | 14824.8 | |
RA822TC-1 | Rat Complete SeraMirExosome RNA Amplification and Profiling Kit for Media and Urine (contains cat# RA800A-1, RA80-1, RA812A-1 and EXOTC50A-1 components) 20 profiles | 20 profiles | 18644.6 | |
RA80-1 | SeraMir Control spike-in Small RNA and qPCR assay | 100 assays | 2215.2 | |
RA800P-3 | SeraMir 3'-Universal Primer bonus pack (for an additional 10,000 qPCR reactions) | 1.2 ml | 1533.6 | |
品牌介紹
美國SBI（System biosciences）公司由前Clontech公司的創始人Dr. Ken Fong所創立。SBI一直致力為生命科學前沿領域提供各種的研究工具和產品。System Biosciences (SBI) 致力于開發*、革新的技術，為客戶研究蛋白組學和基因組學功能提供研究工具。SBI又稱為“慢病毒公司"，提供各種基于慢病毒的所有產品，包括慢病毒的包裝系統，病毒濃縮液，shRNA和microRNA功能研究的慢病毒載體，文庫和高滴度的病毒，同時還提供各種基于慢病毒的延伸產品，在干細胞研究領域提供諸如iPS細胞，的iPS誘導系統還有檢測iPS細胞分化的實時監測系統。SBI同時秉承Clontech在分子克隆領域的成功經驗，推出了一系列的克隆工具，如革命性的無酶連接系統（Cold-fusion Kit），真正做到了5min連接外源基因到載體。
同時SBI還是一家在范圍內很有名的服務公司，曾為多家企業和科研院所提供各種病毒構建，和干細胞服務等。
