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細胞示蹤探針專題
- 線粒體探針
線粒體是一種存在于大多數真核細胞中的由兩層膜包被的細胞器,直徑在0.5-10微米左右。線粒體有“細胞動力工廠"之稱,是細胞內氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷(ATP)的主要場所,主要為細胞活動提供能量。另外,線粒體還承擔了許多其他生理功能,如調節膜電位并導致細胞凋亡。線粒體膜通透性增加也能使誘導凋亡因子(AIF)等分子釋放進入細胞質基質,破壞細胞結構。
1.MitoTracker? 線粒體示蹤
MitoTracker系列探針于檢測活細胞線粒體,具有細胞通透性,易于在有活性的線粒體中積累。一旦線粒體被標記,細胞就能用甲醛固定劑固定,一些MitoTracker探針能在固定之后保留在線粒體內。盡管傳統的線粒體探針如Rhodamine 123也很容易標記線粒體,但是一旦線粒體的膜電位損失,它們就很容易被洗掉。
MitoTracker系列探針具有多種顏色,適合于多色標記實驗。MitoTracker Green FM 是線粒體綠色熒光染料,這種染料定位于線粒體的能力看起來不受線粒體膜電位影響。 該染料可以對活細胞進行染色,但是乙醛固定后不能穩定保存。 MitoTracker Red CMXRos 是一種紅色熒光染料,用于對活細胞線粒體進行染色,并且該染料的積累取決于膜電位。 乙醛固定后,該染料可穩定保存。MitoTracker Red CM-H2XRos 是 MitoTracker Red 的非熒光還原態,在氧化時才會發出紅色熒光。該染料也可以對活細胞線粒體進行染色并且其積累取決于膜電位。 乙醛固定后,該染料可穩定保存。但是,該染料在體外發生氧化反應,就不能檢測到熒光,所以要求保存在惰性(如氮氣)氣體中。MitoTracker? Deep Red FM 是一種遠紅熒光染料(Ex/Em約為 640/662 nm),用于對活細胞線粒體進行染色,并且該染料的積累取決于膜電位。 乙醛固定后,該染料可穩定保存。
Yeasen貨號 | 產品名稱 | Ex/Em(nm) | 是否可以固定 | 規格 | 價格(元) |
40740ES50 | MitoTracker? Red CM-H2XRos 線粒體紅色熒光探針 | 579/599 | Yes | 50μg | 359.00 |
40741ES50 | MitoTracker? Red CMXRos 線粒體紅色熒光探針 | 579/599 | Yes | 50μg | 359.00 |
40742ES50 | MitoTracker? Green FM 線粒體綠色熒光探針 | 490/516 | No | 50μg | 359.00 |
40743ES50 | MitoTracker? Deep Red FM 線粒體深紅色熒光探針 | 644/665 | Yes | 50μg | 359.00 |
2.早期凋亡檢測(線粒體膜電位檢測探針)
在細胞凋亡的過程中往往伴隨著線粒體跨膜電位的破壞,這被廣泛認為是細胞凋亡級聯反應過程中zui早發生的事件之一。它發生在細胞核凋亡特征(染色質濃縮、DNA斷裂)出現之前,一旦線粒體跨膜電位崩潰,則細胞凋亡不可逆轉。線粒體跨膜電位的存在,使一些親脂性陽離子熒光染料如 Rhodamine 123、JC-1、JC-10等可結合到線粒體基質,其熒光的增強或減弱說明線粒體內膜電負性的增高或降低。
JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△Ψm 的理想熒光探針,表現出電勢依賴性的積聚在線粒體內。正常線粒體內,JC-1聚集在線粒體基質中形成聚合物,聚合物發出強烈的紅色熒光(Ex=585 nm, Em=590 nm);而凋亡細胞,線粒體跨膜電位去極化,JC-1從線粒體內釋放,濃度降低,逆轉為發射綠色熒光的單體形式。因此顏色的變化非常直接的反映出線粒體膜電位的變化。線粒體的去極化程度也可以通過紅/綠熒光強度的比例來衡量。JC-1的流式檢測是比較常見的一種方法。
Yeasen貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格(元) |
40705ES03 | JC-1 線粒體膜電位熒光探針 | 1mg | 615.00 |
40705ES08 | JC-1 線粒體膜電位熒光探針 | 5mg | 2450.00 |
40706ES60 | JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒 | 100T | 800.00 |
40707ES03 | JC-10 線粒體膜電位熒光探針 | 1mg | 680.00 |
40707ES08 | JC-10 線粒體膜電位熒光探針 | 5mg | 2763.00 |
40752ES60 | JC-10 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 | 100T | 1600.00 |
40333ES76 | CCCP (10 mM) 細胞凋亡誘導劑CCCP(10 mM) | 500μl |
3.線粒體與活性氧檢測
活性氧,Reactive Oxygen Species(ROS)包括3種含氧的自由基:羥自由基(·OH),超氧陰離子(O2·),氫過氧自由基(HO2);2種過氧化物:過氧化氫(H2O2)和過氧化脂質(ROOH);以及一種含氮的氧化物(NO)。
活性氧(ROS)在通路中的作用:
1)建立宿主自身防御系統,調節基因表達,促進細胞生長和分化,有利于干細胞增殖、神經保護等;
2)濃度過高會引起細胞凋亡,細胞損傷,脂質和蛋白過氧化等。
活性氧(ROS)的主要來源:
1)線粒體的氧化呼吸鏈;2)NADP氧化酶;3)細胞色素P-450。
驗證ROS是否來自線粒體的方法?
當線粒體產生過量ROS的時候,必然導致線粒體本身的正常結構和物理狀態發生變化,常見的比如線粒體膜完整性和膜電位的缺失。
(一)Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit 活性氧(ROS)檢測試劑盒
活性氧檢測試劑盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)是一種基于熒光染料DCFH-DA(2,7-Dichlorodi -hydrofluorescein diacetate)的熒光強度變化,定量檢測細胞內活性氧水平的zui常用方法。
DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細胞膜。進入細胞內后,可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不會通透細胞膜,因此探針很容易被積聚在細胞內。細胞內的活性氧能夠氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。綠色熒光強度與活性氧的水平成正比。在zui大激發波長480nm,zui大發射波長525nm處,使用熒光顯微鏡,流式細胞儀或激光共聚焦顯微鏡等檢測熒光信號,并根據陽性對照Rosup的熒光信號來分析活性氧的真正水平。關于不同細胞增殖和細胞毒性檢測試劑盒的比較和選擇關于不同細胞增殖和細胞毒性檢測試劑盒的比較和選擇,請參考
Yeasen貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格(元) |
50101ES01 | Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit 活性氧(ROS)檢測試劑盒 | 1 kit (100 ~ 500 tests) | 325.00 |
(二)CellROX Orange Reagent, for Live Cell Oxidative Stress Detection氧化應激檢測橙色探針(活細胞)
CellROX Orange氧化應激試劑是能夠可靠地檢測活細胞中的ROS的熒光探針。細胞滲透性CellROX試劑一旦氧化,即可發出明亮熒光。CellROX Orange試劑熒光信號主要位于胞質。
采用傳統的熒光顯微鏡、高內涵成像和分析、微孔板熒光光度計或流式細胞儀測量產生的熒光。染色操作過程極為簡單,可將試劑直接加入*培養基或緩沖液中的細胞。與傳統的ROS檢測染料相比,CellROX試劑的光穩定性極強。
產品特點
A適用于熒光成像、熒光酶標儀、流式細胞術和高內涵篩選;
B對光漂白作用具有較強的抵抗力;
C多重分析:可與不同熒光素染料相兼容;
D功能多樣:適用于活細胞成像或固定樣本。
Yeasen貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格(元) |
50103ES50 | CellROX Orange Reagent, for Live Cell Oxidative Stress Detection 氧化應激檢測橙色探針(活細胞) | 1×50μl | 1628.00 |
50103ES60 | CellROX Orange Reagent, for Live Cell Oxidative Stress Detection 氧化應激檢測橙色探針(活細胞) | 2×50μl | 2958.00 |
(三)MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator 線粒體超氧化物紅色熒光探針
MitoSOX Red是活細胞中的一種特異性靶向線粒體的新型熒光染料。 MitoSOX Red被超氧化物而非其他活性氧類(ROS)和活性氮類(RNS)氧化,氧化產物結合核酸后產生大量紅色熒光,線粒體產生的超氧化物可在熒光顯微鏡下顯示。MitoSOX Red可用于在對活細胞線粒體釋放的超氧化物的直接檢測中區別分離線粒體中的人為誤差。
產品特點
A容易為超氧化物而不是其他的ROS、RNS生成系統氧化;
B吸收波長?發射波長zui大值: ~510?580 nm;
C用于活細胞成像;
D快速選擇性靶向線粒體;
E快速簡便檢測活細胞線粒體中的超氧化物。
Yeasen貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格(元) |
50301ES76 | Catechin hydrate (抗氧化劑) | 500mg | 156.00 |
50302ES76 | Lipoic acid (抗氧化劑) | 500mg | 195.00 |
50303ES05 | NAC (N-乙酰-L-半胱氨酸) (抗氧化劑) | 2g | 86.00 |
50304ES05 | Tocopherol (抗氧化劑) | 2g | 70.00 |
50305ES70 | Catalase(抗氧化酶) | 200mg | 182.00 |
40778ES50 | MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator 線粒體超氧化物紅色熒光探針 | 50 μg | 578.00 |
4.線粒體膜通透性轉換孔(mitochondrial permeablity transition pore,mPTP)分析
線粒體膜通透性轉換孔(mitochondrial permeablity transition pore,mPTP),又稱線粒體巨型通道(magachannel),是存在于線粒體內外膜之間的非選擇性高導電性通道,由多種蛋白質復合組成。線粒體通透性轉換孔 (mPTP)可能參與了細胞死亡過程中線粒體成分的釋放。 相對于僅基于線粒體膜電位的分析來說,該分析試劑盒能更直接地檢測線粒體通透性轉換孔的開放。
Yeasen貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格(元) |
40756ES60 | Mitochondrial Permeability Transition Pore Assay Kit ( flow cytometry) 線粒體膜通透性轉換孔檢測試劑盒(流式分析) | 100T | 758.00 |
5.線粒體定位載體
線粒體定位載體用于研究重組蛋白在線粒體(mitochondria)的定位及功能的便利的工具。研究人員可以根據自己的研究目的選擇相應的定位表達載體,再將感興趣的ORF片段構建到表達載體中進行研究。
陽性對照可以表達GFP,且同樣定位在線粒體上。
細胞定位載體具有以下特點:
1)CMV強啟動子啟動蛋白的表達;
2)C端攜帶c-myc標簽,可用anti-myc抗體檢測;
3)BGH多腺苷酸化位點可以穩定mRNA;
4)f1原點單鏈正義鏈DNA f1 origin for single-stranded rescue of sense DNA
5)攜帶Neomycin抗性基因可用于哺乳動物細胞篩選;
6)Ampicillin抗性和pUC原點可用于E. coli中的篩選;
7)載體帶的熒光標記可通過熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡進行觀察;
8)應用于研究蛋白在微環境中的檢測。
細胞定位是指某種蛋白或表達產物在細胞中的具體存在位置,例如在細胞核( nucleus)內、細胞質( cytoplasm)內、線粒體(mitochondria)或內質網(endoplasmic reticulum)上。
Yeasen貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格(元) |
11906ES03 | pCMV/myc/mito 線粒體定位表達載體(哺乳動物細胞) | 1μg | 1218.00 |
11907ES03 | pCMV/myc/mito/GFP 線粒體定位表達載體(陽性對照,哺乳動物細胞) | 1μg | 1218.00 |
- LysoTracker和Lysosensor溶酶體探針
溶酶體為單層膜蛋白包圍的內含一系列酸性水解酶的小體。溶酶體中含有多種酶,如糖苷酶、酸性磷酸酶、彈性蛋白酶、組織蛋白酶等等,是物質代謝的場所。Lysotracker系列探針用于標記和追蹤活細胞中的酸性細胞器,該系列探針對酸性細胞器具有很高的選擇性,且標記效率高(納摩爾濃度即可有效標記)。Lysotracker探針是細胞膜通透性的,一般聚集在球形的細胞器中。
LysoSensor系列探針可用于活細胞中溶酶體生物發生動力學研究,該探針是向酸性的探針,由于質子化作用聚集在酸性細胞器中。質子化也緩解了染料的熒光淬滅,使熒光強度增加。因此,LysoSensor探針在酸化的環境中表現出pH依賴的熒光強度增加,而LysoTracker的熒光則沒有明顯變化。LysoSensor? Green DND-189的pKa值很低,處于酸性環境中才會發出熒光。LysoSensor? Yellow/Blue DND-160很特別,具有雙激發和雙發射峰,是pH依賴的。在酸性細胞器中,它主要發黃色熒光,而在弱酸性細胞器中,熒光則為藍色。
注:探針標記細胞后,只能用熒光顯微鏡觀察,而不能用流式或熒光酶標儀檢測,因為在總細胞熒光中溶酶體熒光只占非常小的比例。
Yeasen貨號 | 產品名稱 | Abs (nm) | Em (nm) | pKa | 規格 | 價格(元) |
40738ES50 | LysoTracker Green DND-26 溶酶體綠色熒光探針 | 504 | 511 | NA | 50μl | 359.00 |
40739ES50 | LysoTracker Red DND-99 溶酶體紅色熒光探針 | 577 | 590 | NA | 50μl | 359.00 |
40767ES50 | LysoSensor? Green DND-189 溶酶體綠色熒光探針 | 443 | 505 | 5.2 | 50μl | 359.00 |
40768ES50 | LysoSensor? Yellow/Blue DND-160 (PDMPO) 溶酶體黃/藍色熒光探針 | 329, 384 | 440, 540 | 4.2 | 50μl | 359.00 |
- 內質網探針
1.活細胞內質網探針
內質網是細胞中由膜圍成的分支小管、小囊或扁平囊狀結構連通而成的管道系統,可分為粗面內質網和滑面內質網兩種。粗面內質網上附著有核糖體,是合成蛋白質的主要場所;滑面內質網則功能多樣,比如在肝細胞中與解毒和糖代謝有關。ER-Tracker系列探針是細胞通透性的活細胞染料,是ER高度選擇性的。ER-Tracker Blue-White DPX 內質網藍色熒光探針,染色后可用醛類固定,但熒光信號會又明顯損失【信號部分保留】。ER-Tracker Green (BODIPY? FL Glibenclamide) 內質網綠色熒光探針,染色后可用醛類固定,但熒光信號會又明顯損失【信號部分保留】。ER-Tracker Red (BODIPY? TR Glibenclamide)內質網紅色熒光探針染色后可用醛類固定,但熒光信號會又明顯損失【信號部分保留】。
Yeasen貨號 | 產品名稱 | Ex/Em (nm) | Filter | 規格 | 價格(元) |
40761ES50 | ER-Tracker Blue-White DPX, for live-cell imaging內質網藍色熒光探針(活細胞) | 374/430-640 | DAPI or UV longpass | 50μl | 499.00 |
40763ES20 | ER-Tracker Green (BODIPY? FL Glibenclamide), for live-cell imaging 內質網綠色熒光探針(活細胞) | 504/511 | FITC | 20μl (1mM) | 1069.00 |
40764ES20 | ER-Tracker Red (BODIPY? TR Glibenclamide), for live-cell imaging 內質網紅色熒光探針(活細胞) | 587/615 | TRITC | 20μl (1mM) | 1069.00 |
2.內質網定位載體
內質網定位載體用于研究重組蛋白在內質網(Endoplasmic reticulum)的定位及功能的便利的工具。研究人員可以根據自己的研究目的選擇相應的定位表達載體,再將感興趣的ORF片段構建到表達載體中進行研究。
陽性對照可以表達GFP,且同樣定位在內質網上。
Yeasen貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格(元) |
11912ES03 | pCMV/myc/ER 內質網定位表達載體(哺乳動物細胞) | 1μg | 1218.00 |
11913ES03 | pCMV/myc/ER/GFP 內質網定位表達載體(陽性對照,哺乳動物細胞) | 1μg | 1218.00 |
- 高爾基體探針
高爾基復合體的功能主要是將由粗面內質網運來的蛋白類物質進行加工、濃縮、儲存和運送,zui后形成分泌泡排除。
1.活細胞高爾基體探針
Golgi-Tracker Green(BODIPY? FL C5-Ceramide)適用于活細胞高爾基體染色探針,不適用于固定細胞染色。
Golgi-Tracker red(BODIPY? TR C5-Ceramide) 適用于活細胞高爾基體染色探針,不適用于固定細胞染色。
Yeasen貨號 | 產品名稱 | Ex/Em (nm) | 規格 | 價格(元) |
40765ES30 | Golgi-Tracker Green (BODIPY? FL C5-Ceramide) 高爾基體綠色熒光探針(活細胞) | 505/511 | 30μl (1mM) | 789.00 |
40766ES30 | Golgi-Tracker Red (BODIPY? TR C5-Ceramide) 高爾基體紅色熒光探針(活細胞) | 589/617 | 30μl (1mM) | 858.00 |
2.高爾基體反面、順面及中間室探針
NBD C6-ceramide呈綠色熒光(Ex=464nm,Em=532nm),是目前應用較廣泛的選擇性染色高爾基復合體的探針。適用于活細胞和固定細胞的染色。適用于活細胞和固定細胞內反面高爾基體(trans-golgi)染色探針、中間室及反面高爾基體熒光探針(intermediate-to-trans Golgi)。
Lectin GS-II是分離自一種非洲豆科類植物Griffonia simplicifolia 的四聚體蛋白,分子量約為113kD。每個亞基含有一個特異的結合位點,高選擇性結合糖蛋白的末端非還原性α/β-N-乙酰-D-半乳糖苷(GlcNAc)殘基。與其他凝集素不同,GS-II不會與特異的血型反應。Lectin GS-II用于檢測多種組織和細胞中末端N-乙酰-D-半乳糖苷殘基的表達。細胞實驗中,熒光標記的GS-II常用于高爾基體的染色,標記中間室-反式高爾基體,同時還可以標記少突細胞和神經節神經元的高爾基體。我們提供3種顏色的熒光標記Lectin GS-II,綠色熒光Alexa Fluor 488 (L21415),紅色熒光Alexa Fluor 594 (L21416)和遠紅外熒光Alexa Fluor 647 (L32451)。
Lectin Helix pomatia agglutinin (HPA)是一種六聚體蛋白,分子量為70kD,選擇性結合A型紅細胞及α-N-乙酰半乳糖胺殘基末端。在某些細胞中,熒光標記的HPA可以用來標記高爾基體的順面扁平膜囊區。常用的有Alexa Fluor 488和Alexa Fluor 647標記的HPA (L11271, L32454)。
貨號 | 產品名稱 | Ex/Em (nm) | 規格 | 價格(元) |
N-1154 | NBD C6-Ceramide | 464/532 | 1mg | 3525.00 |
L21415 | Lectin GS-II From Griffonia simplicifolia, Alexa Fluor? 488 Conjugate | 495/519 | 500 μg | 1635.00 |
L21416 | Lectin GS-II From Griffonia simplicifolia, Alexa Fluor? 594 Conjugate | 590/617 | 500 μg | 1599.00 |
L32451 | Lectin GS-II From Griffonia simplicifolia, Alexa Fluor? 647 Conjugate | 650/668 | 500 μg | 1610.00 |
L11271 | Lectin HPA From Helix pomatia (edible snail), Alexa Fluor? 488 Conjugate | 495/519 | 1 mg | 2957.00 |
L32454 | Lectin HPA From Helix pomatia (edible snail), Alexa Fluor? 647 Conjugate | 651/668 | 1 mg | 2906.00 |
- 細胞質膜探針——親脂性膜探針
DiD,DiO,DiI和DiR染料是一類親脂性的熒光染料,可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。進入細胞膜后,染料在整個細胞膜上擴散,*濃度時可以使整個細胞膜染色。染料在進入細胞膜之前熒光非常弱,當與細胞膜結合后其熒光強度大大增強,這類染料有著很高的淬滅常數和激發態壽命。它們的熒光顏色區分明顯:DiI(橙色熒光),DiO(綠色熒光),DiD(紅色熒光)和 DiR (深紅色熒光)這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析,另外,DiI (DiIC18(3)) 也可用于內質網膜標記。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發,有著比DiI更長的激發波長和發射波長,在細胞和組織染色中更有價值。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織,自熒光背景低,特別適用于標記細胞和脂質體的體內追蹤。
DiA為親脂性氨基苯乙烯基染料,常用于神經元的示蹤。DiA可與DiI雙色標記神經細胞,是一種比DiO更好的示蹤探針。
CellTracker CM-DiI為DiI 的衍生物,在DiI 中加入了具有中度巰基反應特性的氯甲基取代物,后者能與細胞內含巰基的肽和蛋白結合,使得CM-DiI 能夠抵抗醛類的固定作用。CM-DiI 在細胞固定、破膜及石蠟包埋的整個過程中均能很好的保留在細胞內,因此較DiI 更適于固定后標本的長期示蹤。可與GFP一起用于雙標實驗。
貨號 | 產品名稱 | Ex/Em (nm) | 規格 | 價格(元) |
40725ES10 | DiO (DiOC18(3)) 細胞膜綠色熒光探針 | 484/501 | 10mg | 488.00 |
40725ES25 | DiO (DiOC18(3)) 細胞膜綠色熒光探針 | 484/501 | 25mg | 988.00 |
40726ES10 | DiI (DiIC18(3)) 細胞膜橙紅色熒光探針 | 550/567 | 10mg | 398.00 |
40772ES25 | DiIC16(3) perchlorate 細胞膜橙紅色熒光探針 | 550/567 | 25mg | 988.00 |
40757ES25 | DiR Iodide (DiIC18(7)) 細胞膜深紅色熒光探針 | 748/780 | 25mg | 988.00 |
40758ES25 | DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 細胞膜紅色熒光探針 | 644/663 | 25mg | 988.00 |
40771ES25 | DiA | 491/613 | 25mg | 1658 |
40718ES50 | Celltracker CM-DiI 活細胞示蹤劑CM-DiI (紅色) | 553/570 | 1×50μg | 359.00 |
40718ES60 | Celltracker CM-DiI 活細胞示蹤劑CM-DiI (紅色) | 553/570 | 2×50μg | 679.00 |
40718ES72 | Celltracker CM-DiI 活細胞示蹤劑CM-DiI (紅色) | 553/570 | 5×50μg | 1289.00 |
- 細胞質探針
細胞質由細胞質基質、內膜系統、細胞骨架和包涵物組成,在生活狀態下為透明膠狀物,是生命活動主要場所。
1.活細胞探針
Fluorescein diacetate即FDA,中文名為二乙酸熒光素,是一種具細胞膜滲透性的酯酶底物,常用作細胞活力分析。不僅可以測定酯酶活力,因FDA需要在酯酶的催化下才能活化產生綠色熒光;而且還可用來鑒定細胞膜完整性,只有在完整膜內才能維持熒光。也可用于流式分析。
鈣黃綠素(Calcein, AM)是一種對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑,由于在Calcein(鈣黃綠素)的基礎上加強了疏水性,因此能夠輕易穿透活細胞膜。進入細胞后,Calcein, AM被細胞內的酯酶剪切形成Calcein,從而被滯留在細胞內,發出強綠色熒光。與其它同類試劑(如BCECF, AM和CFDA)相比,由于Calcein, AM細胞毒性極低,是用于活細胞染色的熒光探針,而且不會抑制任何的細胞功能,如增殖和淋巴球的趨化性。Calcein, AM是用于檢測細胞粘附、趨化性和多藥抗藥性的的探針。
CellTracker系列產品(包括CellTracker Orange, CellTracker Green, CellTracker Deep Red等)是一類經典的熒光示蹤染料。這些染料含有氯甲基集團,體外實驗顯示參與GST反應,能與硫醇相互作用,在大多數細胞中,谷胱甘肽的表達水平都比較高,并且谷胱甘肽轉移酶也隨處可見,因此這種染料添加到細胞培養物中,經過洗滌進入細胞,能在細胞中存留多代,并不會轉移到該群的其他細胞中去(僅有很小可能會通過縫隙連接轉移)。這種探針在熒光染料的細胞存留能力上實現了一個突破,用于移植細胞和組織的長時間示蹤非常理想。
2.細胞分化和增殖示蹤探針
CFDA, SE具有細胞膜滲透性,本身不具有熒光發光性。當通過被動運輸穿透細胞膜進入活細胞后,可被胞漿內的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺酯(carboxyfluorescein succinimidyl ester, CFSE),后者可發強烈的綠色熒光,不能穿透細胞膜,能完好的保留在胞內。CFSE還可自發性并不可逆地與細胞內的氨基結合從而偶聯到細胞蛋白質上,同時過量且未被偶聯的CFDA, SE通過被動擴散回到細胞外培養基內,被后續清洗步驟所清除。經CFDA, SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩定,穩定標記的時間可達數月,因此非常適用于細胞群落分析。
CFDA, SE標記細胞的熒光非常均一,優于以前使用的其他細胞示蹤熒光探針如PKH26,并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中,CFSE 標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中,熒光強度變為親代細胞的一半,通過流式細胞儀(FL1通道)根據熒光強度的不同,可檢測出未分裂細胞,分裂一次(1/2的熒光強度),二次(1/4的熒光強度),三次(1/8的熒光強度),以及更多分裂次數的細胞。CFSA,SE可檢測分裂次數多達八次甚至更多。經CFDA, SE標記的細胞可用于體外和體內增殖研究,且具有不會使鄰近細胞染色的功能。CFDA, SEzui常用于淋巴細胞的增殖檢測,也可用于成纖維細胞,自然殺傷細胞,造血祖細胞等其他細胞的增殖檢測。
CFDA, SE標記細胞呈綠色熒光,Ex=494nm,Em=521nm,除了流式細胞儀檢測細胞增殖外,還可用熒光酶標板定量活細胞數目,或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。
另外,還可提供CFDA,SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒,試劑盒中包含配制CFDA,SE儲存液所需的溶劑和細胞標記用的染色緩沖液,簡化了實驗前期準備工作。
貨號 | 產品名稱 | Ex/Em (nm) | 規格 | 價格(元) |
40714ES76 | CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 細胞增殖與示蹤檢測試劑盒 | 494/521 | 500T | 398.00 |
40714ES80 | CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 細胞增殖與示蹤檢測試劑盒 | 494/521 | 1000T | 728.00 |
40715ES25 | CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針 | 494/521 | 25mg | 1599.00 |
40716ES25 | CDCFDA, SE (細胞增殖示蹤熒光探針) | 494/521 | 25mg | 1900.00 |
40719ES50 | Calcein, AM, Ultrapure Grade 鈣黃綠素,超純級 | 490/515 | 1×50μg | 199.00 |
40719ES60 | Calcein, AM, Ultrapure Grade 鈣黃綠素,超純級 | 490/515 | 2×50μg | 369.00 |
40720ES03 | Fluorescein diacetate(FDA) 二乙酸熒光素 | 490/526 | 1g | 145.00 |
40720ES08 | Fluorescein diacetate(FDA) 二乙酸熒光素 | 490/526 | 5g | 380.00 |
40717ES30 | CellTracker Deep Red Dye 活細胞示蹤劑(遠紅) | 630?650 | 2×15μg | 628.00 |
40717ES57 | CellTracker Deep Red Dye 活細胞示蹤劑(遠紅) | 630?650 | 5×15μg | 1388.00 |
40721ES50 | CellTracker Green CMFDA (5-Chloromethylfluorescein Diacetate) 活細胞示蹤劑CMFDA(綠色) | 492?517 | 1×50μg | 478.00 |
40721ES60 | CellTracker Green CMFDA (5-Chloromethylfluorescein Diacetate) 活細胞示蹤劑CMFDA(綠色) | 492?517 | 2×50μg | 748.00 |
40721ES72 | CellTracker Green CMFDA (5-Chloromethylfluorescein Diacetate) 活細胞示蹤劑CMFDA(綠色) | 492?517 | 5×50μg | 1568.00 |
七、細胞骨架探針
1.微絲(F-actin)探針
鬼筆環肽(Phalloidin)是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏(Amanita phalloides)的環狀七肽毒素,選擇性結合于絲狀肌動蛋白F-actin。可與多種熒光染料偶聯,如四甲基羅丹明 (TRITC) 、FITC 、iFluor? 488、iFluor? 647、iFluor? 555等,通過標記組織切片,細胞培養物或無細胞體系中的絲狀肌動蛋白,從而對其進行定性和定量分析。
該系列產品具有以下特點:
親和力高:Kd= 20 nM;
特異性強:選擇性結合于絲狀肌動蛋白F-actin,而不會與單體肌動蛋白G-actin結合;
優于抗體染色:不同于Actin抗體,鬼筆環肽無物種限制性,適用范圍廣;且幾乎不存在非特異性區域,染色區和非染色區域對比性極其明顯;
靈敏度高:納摩爾濃度(nM)染色即可滿足實驗要求;
兼容性好,肌動蛋白活力不受影響:鬼筆環肽衍生物很小,直徑約12-15?,分子量<2000 Da,標記后的肌動蛋白許多生理特性都得以維持;
適用范圍廣:無物種差異性;同樣適用于甲醛固定和打孔處理后的組織樣本。
2.G-actin探針
Alexa Fluor? 488標記Deoxyribonuclease I選擇性結合G-actin(球狀),發明亮的綠色熒光,并可以檢測固定細胞中未聚合的肌動蛋白(actin)。
貨號 | 產品名稱 | 熒光 | 規格 | 價格(元) |
40733ES03 | Amino-Phalloidin 氨基鬼筆環肽 | / | 1mg | 6399.00 |
40734ES75* | TRITC Phalloidin 羅丹明標記鬼筆環肽 | 紅色 | 300T | 489.00 |
40734ES80 | TRITC Phalloidin 羅丹明標記鬼筆環肽 | 1mg | 5980.00 | |
40735ES75* | FITC Phalloidin FITC標記鬼筆環肽 | 綠色 | 300T | 489.00 |
40735ES80 | FITC Phalloidin FITC標記鬼筆環肽 | 1mg | 5980.00 | |
40736ES75 | iFluor? 488 phalloidin iFluor? 488標記鬼筆環肽(綠色) | 綠色 | 300T | 1689.00 |
40737ES75 | iFluor? 555 phalloidin iFluor? 555標記鬼筆環肽(橘色) | 橘色 | 300T | 1689.00 |
40762ES75 | iFluor? 647 phalloidin iFluor? 647標記鬼筆環肽(遠紅) | 遠紅 | 300T | 1689.00 |
D12371 | Deoxyribonuclease I, Alexa Fluor? 488 Conjugate | 綠色 | 5mg | 4126.00 |
3.微管 (microtubulin - polymerized tubulin)探針
Tubulin Tracker Green 是不帶電的無熒光化合物,易于穿過活細胞的質膜。 一旦進入細胞,親脂性封閉基團被非特異性的脂酶切割,得到綠色熒光的帶電形式。主要用于對活細胞中多聚化的微管蛋白染色。
貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格(元) |
40750ES40 | TubulinTracker Green (Oregon Green 488 Conjugated-Paclitaxel) 活細胞微管蛋白綠色探針 | 40T | 6798.00 |
八、細胞核染色
1.常用的細胞核熒光探針
碘化丙啶(PI)是一種可對DNA染色的細胞核染色試劑,是一種溴化乙啶的類似物,在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。不可透過完整細胞膜,但卻能穿過破損的細胞膜而對核染色。紅色熒光(Ex=540nm,Em=608nm)。
DAPI,也稱DAPI dihydrochloride,與雙鏈DNA結合后可以產生比DAPI自身強20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比,對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。因為DAPI是含有特定AT序列DNA的一種嵌入劑,它能像Hoechst染料一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區。DAPI可以透過完整細胞膜對DNA染色。藍色熒光(Ex=364nm,Em=454nm)。
7-氨基放線菌素(7-AAD)是一種細胞核熒光染料,嵌入雙鏈DNA,不可透過完整細胞膜,隨著細胞凋亡、細胞死亡過程,質膜對7-AAD的通透性逐漸增加。廣泛用于FACS,熒光強度雖低于PI,但是適合于FITC,PE同時檢測。紅色熒光(Ex=488nm,Em=650nm)。
Hoechst 33258是一種藍色細胞核熒光染料,嵌入雙鏈DNA小溝,可以透過完整細胞膜。嵌入雙鏈DNA后釋放強烈的藍色熒光,對細胞的毒性較低。常用于細胞凋亡檢測,根據正常和凋亡時期染色質結構的差異。普通細胞核染色。藍色熒光(Ex=352nm,Em=461nm)。
Hoechst 33342 是一種藍色細胞核熒光染料,嵌入雙鏈DNA小溝,可以透過完整細胞膜,對細胞毒性較低。常用于細胞凋亡檢測,及普通細胞核染色。藍色熒光(Ex=350nm,Em=461nm)。
貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格(元) |
40710ES03 | Propidium iodide Staining Solution(1mg/ml)碘化丙啶染液(1mg/ml) | 1ml | 265.00 |
40711ES10 | PI (Propidium iodide) 碘化丙啶 | 10mg | 189.00 |
40711ES60 | PI (Propidium iodide) 碘化丙啶 | 100mg | 1155.00 |
40712ES08 | Rhodamine 123 羅丹明123 | 5mg | 360.00 |
40713ES10 | Dihydrorhodamine 123 | 10mg | 1899.00 |
40722ES03 | 7-AAD 7-氨基放線菌素D | 1mg | 1438.00 |
40723ES10 | 5-TAMRA | 10mg | 325.00 |
40724ES10 | Trypan blue 臺盼藍 | 10g | 237.00 |
40727ES10 | DAPI | 10mg | 459.00 |
40728ES03 | DAPI染液(5mg/ml) | 1mg (200μl) | 198.00 |
40728ES10 | DAPI染液(即用型) | 10ml | 98.00 |
40728ES50 | DAPI染液(即用型) | 50ml | 335.00 |
40729ES10 | Hoechst 33258 | 10mg | 180.00 |
40729ES76 | Hoechst 33258 | 500mg | 3189.00 |
40729ES80 | Hoechst 33258 | 1g | 5310.00 |
40730ES03 | Hoechst 33258 染液(1mg/ml) Hoechst 33258 Stain Solution (1mg/ml) | 1ml | 280.00 |
40730ES10 | Hoechst 33258 染液(即用型) Hoechst 33258 Stain Solution (Ready-to-use) | 10ml | 90.00 |
40730ES50 | Hoechst 33258 染液(即用型) Hoechst 33258 Stain Solution (Ready-to-use) | 50ml | 285.00 |
40731ES10 | Hoechst 33342 | 10mg | 215.00 |
40732ES03 | Hoechst 33342 染液(1mg/ml)Hoechst 33342 Stain Solution (1mg/ml) | 1ml | 295.00 |
40732ES10 | Hoechst 33342 染液(即用型)Hoechst 33342 Stain Solution (Ready-to-use) | 10ml | 98.00 |
40732ES50 | Hoechst 33342 染液(即用型)Hoechst 33342 Stain Solution (Ready-to-use) | 50ml | 325.00 |
40744ES60 | Hoechst 33342/PI 雙染試劑盒 Hoechst 33342/PI Double Stain Kit | 1KIT(100 T) | 219.00 |
40745ES64 | 7-AAD Viability Staining Solution 7-AAD細胞活力染色液 | 150T | 169.00 |
40746ES01 | 吖啶橙/EB檢測試劑盒 | 1KIT | 188.00 |
40747ES76 | Calcein-AM/PI 活細胞/死細胞雙染試劑盒 Calcein-AM/PI Double Stain Kit | 500T | 659.00 |
40747ES80 | Calcein-AM/PI 活細胞/死細胞雙染試劑盒 Calcein-AM/PI Double Stain Kit | 1000T | 1089.00 |
2.細胞核定位載體
細胞核定位載體用于研究重組蛋白在細胞核(Endoplasmic reticulum)的定位及功能的便利的工具。研究人員可以根據自己的研究目的選擇相應的定位表達載體,再將感興趣的ORF片段構建到表達載體中進行研究。
陽性對照可以表達GFP,且同樣定位在細胞核上。
貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格(元) |
11910ES03 | pCMV/myc/nuc 細胞核定位表達載體(哺乳動物細胞) | 1μg | 1218.00 |
11911ES03 | pCMV/myc/nuc/GFP 細胞核定位表達載體(陽性對照,哺乳動物細胞) | 1μg | 1218.00 |