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Hieff MutTM 系列試劑盒是基于Hieff CloneTM快速克隆技術的定點突變系統,目標質粒擴增產物經DpnI消化、Hieff CloneTM重組環化后直接進行轉化即可完成定點突變。本試劑盒由兩個模塊組成:
HieffTM Pfu DNA Polymerase擴增模塊:提供zui高保真度的擴增,可擴增20 kb以內的質粒;擴增以指數方式進行,極大減少了模板使用量,有利于原始甲基化模板的*降解。
Hieff CloneTM快速克隆模塊:可環化PCR產物。
Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit單點突變試劑盒適用于長度小于20 kb的任何質粒擴增,可針對單堿基、連續多堿基、不連續雙堿基(相距超過50 bp)定點突變。
Hieff MutTM Multi Site-Directed Mutagenesis Ki多點突變試劑盒t可一次性向目標質粒上3至5個不連續位點(相距超過50bp)同時引入定點突變。
使用Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit進行單堿基(或連續多堿基)定點突變
使用Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit進行不連續雙堿基定點突變實驗方案 (兩突變位點相距超過50 bp)
使用Hieff MutTM Muti Site-Directed Mutagenesis Kit進行不連續雙堿基定點突變實驗方案 (兩突變位點相距超過50 bp)
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規格 | 引物對數 | *(元) |
Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit | 11003ES10 | 10 rxn | 1對 | 720 |
2對 | ||||
Hieff MutTM Multi Site-Directed Mutagenesis Kit | 11004ES10 | 10 rxn | n≤5對 | 1228 |
FAQ
Q1. 請問單點突變/多點突變是否都是每個位點設計一對引物?是否都包括堿基/氨基酸突變,堿基插入和缺失?堿基插入/缺失的zui大長度是多少?是否可以進行連續氨基酸的突變,氨基酸的數量限制是多少?
A1:單點突變/多點突變是每個位點設計一對引物;正反向引物可以包括堿基/氨基酸突變,堿基插入和缺失,也可以將這些堿基/氨基酸突變/堿基插入和缺失放在一條引物上;堿基插入/缺失的zui大長度沒有限制,可為任何長度;可以進行連續氨基酸的突變,無特別數量限制。
Q2. 引物設計的原則是什么?有無的引物設計軟件,若沒有,推薦幾個好用的引物設計軟件。
A2:引物設計基本原則是使擴增產物末端有同源序列即可。無官設計軟件,推薦軟件Primer5,Vector NTI。
Q3. 本試劑盒可以進行多點突變,能夠同時進行幾個位點的突變? 突變效率如何?進行單點突變的突變效率是多少?
A3:zui高同時突變6個獨立位點(每個位點之間相距超過100bp)。突變效率非常高(單次反應500多個克隆,陽性率超過95%)
Q4. 該kit不含有感受態細胞,推薦的感受態細胞是哪些?
A4:*0,DH,XL10。常規克隆菌都可以。
Q5. 該試劑盒總共的工作時間一般多久?
A5:實驗操作時間3小時左右。
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