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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產(chǎn)品信息
| 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存 | 價(jià)格（元） |
| rTEV Protease 重組煙草蝕紋病毒蛋白酶 | 20403ES80 | 1000U | -20℃ | 577.00 |
| rTEV Protease 重組煙草蝕紋病毒蛋白酶 | 20403ES92 | 10×1000U | -20℃ | 4955.00 |
產(chǎn)品描述
重組型TEV蛋白酶（rTEV）是經(jīng)過基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅保持天然TEV酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更好的穩(wěn)定性和特異性。rTEV是一種用來切除融合蛋白上親和標(biāo)簽的常用工具酶，具有很強(qiáng)的位點(diǎn)特異性，嚴(yán)格識(shí)別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位點(diǎn)在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。普遍應(yīng)用的七氨基酸序列為：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30℃時(shí)可達(dá)到*活性，但在pH 6.0-8.5和溫度4-30℃的廣泛范圍內(nèi)皆有活性（見表1），使得反應(yīng)條件的選擇可根據(jù)目的蛋白的情況而靈活變動(dòng)。另外rTEV切割后也能利用其N端的 6×His標(biāo)簽，通過Ni-NTA樹脂去除，以達(dá)到純化目的蛋白的目的。
表1. 不同溫度下rTEV酶切活性
| 反應(yīng)時(shí)間 | 不同溫度下剪切活性(%) | ||||
|
| 4°C | 16°C | 21°C | 30°C | |
| 1 h | 34 | 58 | 56 | 70 | |
| 2 h | 58 | 80 | 78 | 90 | |
| 3 h | 71 | 99 | 99 | 99 | |
| 0.5h | 84 | 99 | 99 | 99 | |
影響天然TEV酶活性的常見因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/ml）、Pestatin A（1 mM），EDTA（1 mM）以及E-64（3 mg/ml），以上這些蛋白酶抑制劑對(duì)rTEV的活性沒有影響；2）Zn離子（＞5 mM）對(duì)rTEV活性有抑制；3）與半胱氨酸反應(yīng)的試劑也是rTEV的潛在抑制劑。
產(chǎn)品組分
| 組分編號(hào) | 組分名稱 | 產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 | |
| 20403ES80 | 20403ES92 | ||
| 20403-A | rTEV Protease（5 U/μl） | 200 ul | 10×200 µl |
| 20403-B | 20× rTEV Buffer（含DTT） | 2 ml | 10×2 ml |
產(chǎn)品性質(zhì)
| 來源（Source） | 大腸桿菌 |
| 外觀（Appearance） | 無菌液體 |
| 酶濃度（Concentration） | 5 U/μl |
| 活性定義（Activity） | 在1×rTEV Buffer（ |
| 純化（Purification ） | Ni親和純化 |
| 純度（Purity） | ＞95%（by SDS-PAGE） |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋（wet ice）運(yùn)輸。
收到產(chǎn)品后放到-20 ºC保存可保存6個(gè)月。-70℃可保存12個(gè)月。
應(yīng)用實(shí)例
1、在EP管中配制如下反應(yīng)體系，
| 融合蛋白 | 20 μg |
| rTEV Protease | 1-3 μl |
| 20* rTEV buffer* | 7.5 μl |
| DDW（超純水） | Up to 150 μl |
*注：20× rTEV buffer中已含有DTT，不需要另外添加。
2、30℃孵育，在1、2、4、6小時(shí)分別吸出30 μl上述反應(yīng)液，置于單獨(dú)的EP管中。
3、向上述EP管中加入30 μl 2×SDS Loading Buffer，置于-20℃。
4、樣品全部反應(yīng)完畢后，樣品煮沸5 min，取40 μl進(jìn)行SDS-PAGE分析。確定*反應(yīng)時(shí)間。
如融合蛋白要求低溫處理，可將反應(yīng)液置于4℃，請(qǐng)延長反應(yīng)時(shí)間，并增加rTEV酶用量。
注意事項(xiàng)
1） 對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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