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產(chǎn)品介紹
DAPI，也稱DAPI dihydrochloride，是一種常用的核酸染料，和EB(ethidium bromide)相比，DAPI對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。盡管DAPI不能通過活細(xì)胞膜，但可以通過提高濃度使之進(jìn)入活細(xì)胞。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來檢測酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，Microplasm DNA以及染色體DNA。
技術(shù)原理
DAPI可以和雙鏈DNA富含AT序列的小溝結(jié)合，產(chǎn)生比自身強(qiáng)20多倍的藍(lán)色熒光。DAPI也可對RNA進(jìn)行染色，染色機(jī)理是其可以選擇性嵌入“AU序列"并發(fā)出熒光。相比DAPI-dsDNA（Ex/Em=358 nm/461 nm），DAPI-RNA具有較長的最大發(fā)射波長（500 nm），其熒光亮度僅有DAPI-dsDNA的20%。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸，5 mg/mL的DAPI儲存液于-20oC避光保存，1年有效。
使用方法
1、用雙蒸水或PBS稀釋母液，配制成所需要的工作的濃度（0.5-10 μg/mL）。
2、對于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的最后進(jìn)行。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行DAPI 染色。
3、細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量DAPI染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對于六孔板一個(gè)孔需加入1 mL染色液，對于96孔板一個(gè)孔需加入100 μL染色液。
4、在37℃培養(yǎng)細(xì)胞 10～20 分鐘。
5、用 PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。
6、直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長360 nm，發(fā)射波長460 nm。
不同DAPI染色的結(jié)果
注意事項(xiàng)
1）DAPI對人體有一定刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。
2）熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。
3）為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。
4）低濃度的DAPI不容易穿透細(xì)胞膜。
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 規(guī)格 |
DAPI染液（5mg/ml） | 40728ES03 | 1mg (200μl) |
DAPI 4’,6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚 | 40727ES10 | 10mg |
Propidium iodide Staining Solution（1mg/ml）碘化丙啶染液（1mg/ml） | 40710ES03 | 1ml |
PI (Propidium iodide) 碘化丙啶 | 40711ES10/60 | 10mg/100mg |
7-AAD 7-氨基放線菌素D | 40722ES03 | 1 mg |
Trypan Blue臺盼藍(lán) | 40724ES10 | 10 g |
