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細胞酪氨酸磷酸酶性比色法定量檢測試劑盒說明書
閱讀：736 發布時間：2023-3-22主要用途
細胞酪氨酸磷酸酶（PTP）活性比色法定量檢測試劑是一種旨在使用特異性合成底物磷酸化多肽，在PTP去磷酸化后，釋放出游離磷酸根，由硫酸亞鐵氨還原產生鉬藍顯色反應后峰值的變化，采用比色法測定其峰值的變化，以此進行測算單位酶活性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種細胞裂解懸液樣品包括免疫沉淀復合物和粗提或部分純化酶樣品的蛋白酪氨酸磷酸化酶活性及其抑制劑的檢測。廣泛應用于細胞凋亡、蛋白組學、病理生理學、變等研究。產品不含污染性蛋白酶，嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，反應優化，檢測敏感。
技術背景
蛋白去磷酸化在于平衡細胞中激酶的作用，調節真核生物中各種不同的細胞生理活動，包括細胞繁殖與分化、分裂、代謝、收縮性、授精、學習和記憶、細胞間交流、細胞形態和遷移、基因轉錄、mRNA加工、分子運輸、胚胎發育、器官發育、組織內環境穩定、免疫功能等。一旦異常，會產生腫瘤和免疫缺陷性疾病。蛋白酪氨酸磷酸酶（protein tyrosine phosphatase；PTP；EC 3.1.3.48）屬于磷酸化酶家屬中的一員，由一組含有磷酸化酪氨酸（phosphotyrosine）四類酶組成，其功能在于移去蛋白質上磷酸化酪氨酸殘基的磷酸基團，實現蛋白質轉譯后修飾，使之蛋白質之間相互反應和細胞內定位，影響蛋白質的穩定性和活性，成為信號通路和細胞周期控制的主要調節元素，尤其在胰島素識別、軸突生長、血管生成、免疫反應和炎癥反應等發揮重要作用。基于特異性底物磷酸化多肽DADEpYLIPQQG，受到蛋白氨酸酪磷酸酶的去磷酸化作用，釋放出游離磷酸根，由硫酸亞鐵氨還原產生鉬藍顯色反應后，在分光光度儀下（660nm波長）產生峰值的變化，由此測定酪氨酸磷酸酶的特異活性。\
保存方式
保存裂解液（Reagent B）、緩沖液（Reagent C）、反應液（Reagent E）和顯色液（Reagent F）在－20℃冰箱里，避免反復凍融；其余的保存在4℃冰箱里；顯色液（Reagent F）具有腐蝕性，避免直接用手接觸； 有效保證6月
用戶自備
15毫升離心管：用于樣品處理的容器
1.5毫升離心管：用于樣品處理和保存的容器
細胞刮脫棒：用于貼壁細胞脫離
（微型）臺式離心機：用于樣品收集
培養箱：用于孵育反應物
比色皿：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
注意事項
1． 本產品為25次操作，包括5次（點）標準測定
2． 操作時，須戴手套
3． 系統操作過程中，標準曲線測定只需1條
4． 顯色液（Reagent F）具有腐蝕性，避免直接用手接觸
5． 樣品切忌使用磷酸緩沖液/脫氧膽酸納、SDS、EDTA、EGTA、巰基乙醇等處理
6． 如果使用免疫沉淀復合物作為待測樣品，建議使用通用型蛋白免疫共沉淀（蛋白A樹脂）試劑盒－30029.1
7． 比色測定后，比色皿須清洗
8． 如果用戶沒有660nm波長，可以使用600至660nm的任一波長替代
9． 吸光讀數增高，表明具有酶活性
10． 建議待測樣本蛋白濃度為100微克/20微升；如果樣本酶活性過低或過高，則可以增加或降低樣本量； （本公司提供 BCA蛋白質濃度定量試劑盒－30031.1）
11． 可以使用PTP抑制劑氟化鈉（NaF）作為抑制劑對照或陰性對照
12． 蛋白氨酸酪磷酸化酶活性單位濃度定義：在30℃溫度下，pH 5.2的情況下，每單位酶在單位時間內（每分鐘）釋放1微摩爾的磷
13． 本公司提供系列蛋白磷酸酶檢測試劑產品
使用承諾
本公司秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾"的宗旨為我們的用戶提供優質產品和服務。用戶收到貨后，應按照產品說明書上的規定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內若發現確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯系，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。