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技術文章

滬鼎選擇多肽免疫原的絕招

閱讀:1340          發布時間:2014-8-29

【滬鼎選擇多肽免疫原的絕招】
 1. 從天然蛋白質的可及區中選擇肽免疫原。這些區域通常暴露在與水相環境接觸的蛋白質表面上。利用計算機程序為蛋白質中的各個氨基酸分配“親水性指數”,然后繪圖。這樣便可觀察到親水區域。
 2. 大多數蛋白質數據庫系統內都含有親水性分析程序,包括:ProtScale、PlotStructure、PepPlot。
 3. 確保正確的物種和蛋白質序列已經過鑒定。
 4. 使用OMIM和LocusLink來建立結構域。其他蛋白質中存在的結構域,應當避免在免疫原的序列中出現,因為它們會增加交叉反應的可能性。另外,抗體可能無法結合某些蛋白質區域,即球狀蛋白質中心或跨膜區。 
 5. 避免存在多個谷氨酰胺殘基,因為這會造成多肽間發生氫鍵結合。
 6. 嘗試加入脯氨酸和酪氨酸殘基。這些殘基能夠使免疫原形成天然蛋白質中可能存在的某些結構基元。
 7. 避免已知區域被翻譯后修飾,因為可能會掩蓋抗體識別位點。
 8. 將末端半胱氨酸殘基加入到肽序列中,則可以利用Sulfo-SMCC交聯劑將肽偶聯到載體蛋白。
 9. 如果合成的抗體需要親和純化,則還可利用末端半胱氨酸殘基將此肽鏈直接固定到SulfoLink親和基質上。
 10. 避免存在復雜區域。
 11. 避免存在多個谷氨酰胺殘基,因為這會造成多肽間發生氫鍵結合。
    在選擇的過程中,上海恒遠生物提出了一些需要注意的地方:如果此肽鏈來源于蛋白質的N端,則應當將半胱氨酸加入到肽鏈的C端,反之亦然。如果此肽鏈來源于內部蛋白質序列,則可隨意分配半胱氨酸。

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