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犬細粒棘球絳蟲抗原ELISA試劑盒使用說明書

【產品名稱】

通用名稱：犬細粒棘球絳蟲抗原ELISA檢測試劑盒

英文名稱：Hydatid（ Hyd） coproantigens Test Kit for Canine.

【用途】 本試劑盒采用夾心ELISA方法定性檢測犬糞細粒棘球絳蟲抗原。

【規格】 96T/盒

【儲藏與有效期】 2～8℃保存，有效期12個月。

【試劑盒組成】

【犬細粒棘球絳蟲抗原ELISA試劑盒使用說明書溶液配制】

1. 洗滌液配制：用蒸餾水或去離子水將洗滌液 10×按 1:9 稀釋，充分混勻即為工作濃度洗滌液。

2. 樣品稀釋液配制：用蒸餾水或去離子水將樣品稀釋液 2×按1:1 稀釋（如取100mL 濃縮樣品稀釋液加 100mL 蒸餾水或去離子水），充分混勻即為工作濃度樣品稀釋液。

【實驗準備】所有試劑使用前恢復至室溫(25℃左右)，以免溫度過低影響抗原抗體反應。

【樣品要求】
1. 本試劑適用于檢測犬糞樣品；
2. 應采集新鮮的犬糞樣品進行測試。若不能及時檢測，應將糞樣低溫凍存，防止反復凍融。如犬糞難以溶解，應適當搗碎處理。

【操作步驟】

1. 樣品處理：犬糞樣品需要預先低溫（ -70℃以下） 冷凍 7 天以上，以滅活蟲卵。稱取 1克犬糞,加入1mL樣品稀釋液，充分攪拌混勻，靜置10分鐘，再3000rpm離心10分鐘，取上清液待檢。
2. 加樣反應：樣品孔，每孔僅加入100μL待檢樣品；陰性對照2孔，每孔僅加入100μL陰性對照品；陽性對照 2 孔，每孔僅加入 100μL 陽性對照品。蓋好封板膜，37℃避光反應30分鐘。

3. 洗板：甩去孔內液體，每孔注滿工作濃度洗滌液洗板3 次，每次均需靜置1分鐘；最后一次甩凈，拍干。

4. 加酶反應：每孔加酶結合物100μL，蓋好封板膜，37℃避光反應30分鐘。甩去孔內液體，如上洗板，拍干。

5. 顯色反應：按所需用量，臨用前取等體積底物液和顯色液充分混勻后每孔加100μL，蓋好封板膜，37℃避光反應10分鐘。

6. 終止反應：加終止液50μL，用酶標儀于450nm波長（630nm作為參比波長）讀取OD值。

【結果判定】

1. Cut-off 值（COV）=陰性對照平均OD值×2.1（陰性對照孔OD 值＜0.15 時按0.15計）。
2. 有效性判定：
陰性對照孔 OD 值≤0.30（ 若大于 0.30 則實驗無效）；
陽性對照孔 OD 值≥0.50（ 若小于 0.50 則實驗無效）。

【判定標準】

樣品 OD 值≥COV， 判為犬細粒棘球絳蟲抗原陽性；
樣品 OD 值＜COV， 判為犬細粒棘球絳蟲抗原陰性。

【檢驗方法的局限性】本試劑盒僅供篩查，不作為確診依據。

【注意事項】

1. 所有試劑使用前恢復至室溫(25℃左右)，以免溫度過低影響抗原抗體反應。

2. 實驗前應用溫度計檢查溫箱溫度，溫度過高或過低影響OD值高低。

3. 包被板反應時嚴禁堆疊放置，應該平鋪且板間有空隙，不要離溫箱壁太近。

4. 實驗所用移液器及設備應定期校準。

5. 底物液和終止液對皮膚有刺激性，請帶手套注意個人防護。

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