氨快速檢測試劑盒引言:氨是一種廣泛存在的自然化合物，經常是微生物蛋白質代謝的產物，因此，氨可以作為果汁，牛奶，奶酪，肉類，海產食品和烘焙食品的質量指標。與其他試劑盒相比，本試劑盒的優點在于采用了不受丹寧抑制的谷氨酸脫氫酶，丹寧常見于果汁和葡萄酒中。在葡萄酒生產中，氨的檢測對于計算酵母可利用氮（YAN）很重要。YAN由三種高變量組成：游離氨離子，初級氨態氮（來源于游離氨基酸）和L-精氨酸側鏈。zui精確地測定YAN需要定量檢測三種化合物，因此，Megazyme設計生產了L-精氨酸/尿素/氨檢測試劑盒（K-LARGE）和初級氨態氮檢測試劑盒（K-PANOPA）。
原理:

氨的定量分析只需要一步酶化反應。在還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）和谷氨酸脫氫酶（GIDH）的存在下，氨（或氨離子；NH4+）與2-酮戊二酸反應生成L-谷氨酸和NADP+（1）。

反應中產生的NADP+ 的量可以用來計量氨的量。NADPH的消耗量可通過340nm處減少的吸光率測定。

特異性，靈敏度，線性和精確性

此方法特異性檢測氨。在試劑級硫酸銨的檢測中，大約可以預期結果為100%。
檢測的靈敏度為0.005 個吸光度單位。這相當于zui大樣品體積為2.00 mL 時，樣品溶液濃度為0.018 mg/L。檢測限為 0.071 mg/L，這是在0.020的吸光度差異，zui大樣品體積為2.00 mL得到的 。
氨檢測的線性檢測范圍為0.2 到 7 μg （圖1）。在重復測定中，同一份樣品溶液，可能產生0.005 到 0.010個吸光光度值的差異。這就相當于樣品體積為2.00 mL，樣品溶液中氨的濃度大約為0.018到0.035 mg/L。如果樣品在制備階段被稀釋過,結果要乘以稀釋倍數F。如果樣品制備階段，稱量過樣品，比如10 g/L，可能會產生0.02 到 0.05 g/100 g 的差異。

干擾:

如果氨的轉換在實驗的時間內（大約3分鐘）*完成，通常認為是沒有發生任何干擾。不過，這個也可以進一步驗證，通過在實驗的完成時，向比色皿中加入氨（大約每0.1mL4ug），吸光光度值有會明顯降低。
樣品中的干擾物質的分析可以通過加入一個內參來確定。需要進行一個標準品定量回收實驗，通過這個回收實驗（也就是在zui初的提取步驟中向樣品中加入氨）可以算出樣品在處理和提取過程中的損失量。

在堿性緩沖液溶液中，蛋白片段會緩慢釋放氨，這將會導致緩慢的漸變反應（creep action）。這不是試劑盒的問題。果汁中的丹寧會明顯抑制來源于牛肝的GIPH，但Megazyme公司的氨和尿素/氨檢測試劑盒使用的GIPH是其他來源的，因此不存在抑制問題。

安全:

氨檢測中用到的試劑沒有有毒物質。不過濃縮緩沖液中含有*（0.02 % w/v）作為防腐劑。這個通常需要按照有毒物質的安全操作流程進行試驗。

試劑盒:

Megazyme 氨檢測試劑盒可以進行96次試驗，并提供所有的實驗方法。

瓶1:TEA緩沖液 （48 mL，0.5 M，pH 8.0） 加咪唑（200mM），2-酮戊二酸（40mM）和* （0.02 % w/v）作為防腐劑 4°C保存，穩定性>2年。.
瓶2:含NADPH的片劑。這些片劑裝在預裝填干燥劑的特殊塑料小瓶里。在打開瓶子取出片劑之前，需恢復至室溫（盡可能在有干燥劑的環境下），這可以使剩余片劑不會吸收水分因此保證zui大的穩定性。4°C 或-20°C干燥保存（盡可能在有干燥劑的環境下），穩定性>2年。

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