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DNA實驗技術:瓊脂糖核酸電泳

2013-8-22  閱讀(1884)

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1. 用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈,放在制膠平板上,封閉模具邊緣,架好梳子;

2. 根據欲分離 DNA 片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠:準確稱量瓊脂糖干粉,加入到配膠用的三角燒瓶內,定量加入電泳緩沖液(一般20~30 ml) ;

3. 放入到微波爐內加熱熔化。冷卻片刻,加入一滴熒光染料,輕輕旋轉以充分 混勻凝膠溶液,倒入電泳槽中,待其凝固;

4. 室溫下 30~ 45 分鐘后凝膠*凝結, 小心拔出梳子, 將凝膠安放在電泳內槽;

5. 向電泳槽中倒入電泳緩沖液,其量以沒過膠面 1mm 為宜,如樣品孔內有氣 泡,應設法除去;

6. 在 DNA 樣品中加入 10×體積的載樣緩沖液(loading buffer) ,混勻后,用槍 將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內;

7. 接通電源,紅色為正極,黑色為負極,切記DNA 樣品由負極往正極泳動 ( 靠近加樣孔的一端為負) 。一般 60~100V 電壓,電泳 20~40min 即可;

8. 根據指示劑泳動的位置,判斷是否終止電泳;

9. 電泳完畢,關上電源,在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置,并與核酸分子 量標準 Marker 比較被擴增產物的大小。

瓊脂糖凝膠濃度與線形 DNA的*分辨范圍

瓊脂糖凝膠濃度 線形 DNA的*分辨范圍(bp)
0.5% 1,000~30,000
0.7% 800~12,000
1.0% 500~10,000
1.2% 400~7,000
1.5% 200~3,000
 2.0%  50~2,000

編輯: hollyemp

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