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農桿菌感受態細胞制備實驗標簽：農桿菌感受態細胞制備植物轉基因農桿菌感受態細胞制備可以：（1）用于建立農桿菌轉化體系；（2）用于農桿菌表達系統構建；（3）用于農桿菌其他分子生物學研究。實驗方法氯化鈣法電轉農桿菌感受態實驗方法原理在基因工程操作中，感受態細胞的制備和質粒的轉化是一項基本技術。感受態是細菌細胞具有的能夠接受外源DNA的一種特殊生理狀態。農桿菌的感受態可用CaCl2處理而誘導產生。將正在生長的農桿菌細胞加入到低滲的CaCl2溶液中，0℃下處理便會使細菌細胞膜的透性發生改變，此時的細胞呈現
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雙元載體的農桿菌轉化1.1農桿菌感受態細胞的制備1.1.1.取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml鏈霉素平板劃線，28℃培養。1.1.2.挑取單菌落接種于5mlYM液體培養基中，220rpm28℃振蕩培養12-16hr。1.1.3.取2ml菌液轉接于100mlYM液體培養基中，28℃220rpm振蕩培養至OD600=0.5。1.1.4.轉入無菌離心管，5000rpm離心5min,去上清液。1.1.5.加入10ml預冷的0.1M的CaCl2溶液，輕輕懸浮細胞，冰上放置20min。4℃500
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標簽：酵母感受態細胞制備酵母感受態細胞制備可以：（1）用于建立酵母轉化體系；（2）用于酵母表達系統構建；（3）用于酵母其他分子生物學研究。實驗方法化學法試劑盒制備法實驗材料釀酒酵母試劑、試劑盒YPDA液體培養基蒸餾水甘油二甲基亞砜儀器、耗材培養皿離心機離心管冰箱實驗步驟一、試劑與耗材1.試劑細菌用-酵母提取物（Fisher）、細菌用-蛋白胨（Fisher）、葡萄糖（Fisher）、細菌用-瓊脂粉、去離子水、甘油（Sigma）、二甲基亞砜（Sigma）、聚乙二醇3350（Sigma）、醋酸鋰（Si
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標簽：枯草芽孢桿菌感受態細胞制備枯草芽孢桿菌感受態細胞的制備可以：（1）用于建立枯草芽孢桿菌轉化體系；（2）用于其基因改造；（3）用于提高枯草芽孢桿菌生產性能相關研究。實驗方法化學法化學改進法實驗材料枯草芽孢桿菌168試劑、試劑盒SPI培養基EGTASPII培養基檸檬酸鈉EGTA氫氧化鈉KH2PO4K2HPO4MgCl2MgSO4葡萄糖酵母膏（NH4）2SO4儀器、耗材培養箱培養皿錐形瓶紫外分光光度計接種環離心管實驗步驟一、試劑配制1.SP鹽0.2%（NH4）2SO4，1.4%K2HPO4，0.
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摘要：本實驗介紹了脂質體轉染的幾個方法。實驗原理脂質體（LR）試劑是陽離子脂質體DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前條件下zui方面的轉染方法之一。轉染率高，優于磷酸鈣法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA轉染到各種細胞。用LR進行轉染時，首先需要優化轉染條件，應找出該批LR對轉染某一特定細胞適合的用量、作用時間等，對每批LR都要做。先要固定一個DNA的量和DNA/LR混合物與細胞相互作用的時間，DNA可從1-5ug和孵育時間6h，開始，
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一、實驗目的學習和掌握外源基因導入真核細胞的主要方法——脂質體介導的轉染。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料。二、實驗原理上圖所示是脂質體介導轉染的示意圖，它顯示了外源質粒進入細胞的一般過程。外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和病毒介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入；磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染
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感受態制備：大腸桿菌感受態細胞的制備、重組DNA的轉化、克隆篩選
1.實驗目的和要求通過本實驗學習氯化鈣法制備大腸桿菌感受態細胞和外源質粒DNA轉入受體菌細胞的技術以及篩選轉化體的技術。了解細胞轉化的概念及其在分子生物學研究中的意義。2.相關知識及原理感受態細胞（Competentcells）：受體細胞經過一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化學試劑法）的處理后，細胞膜的通透性發生變化，成為能容許多有外源DNA的載體分子通過的感受態細胞（competentcell）。轉化（transformation）：是將異源DNA分子引入一細胞株系，使受體細胞獲得新的 -
一、體外轉錄在無菌1.5ml微型離心管中，結合以下內容：4ul5倍轉錄緩沖液2ul0.1MDTT4ul2.5MMNTP（A，C，G）0.8ulRNA酶抑制劑（25U/ul）RNA酶抑制劑（Promega）中100UM冷UTP1ul/ugUL線性DNA模板5ul10UCI/ULP32UTP（800Ci/mmol）1ulRNA聚合酶SP6，T7或T3總體積?20ul。孵育1小時，37℃。2ul每個轉錄的DNA酶I，孵育20分鐘，37℃。二、探頭凈化凈化探頭使用QIAGEN公司的QIAquick核苷酸
