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免疫學技術專題:斑點金免疫滲濾測定法(DIGFA)

2014-6-3  閱讀(2240)

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基本原理

斑點金免疫滲濾測定法是在斑點免疫滲濾測定法基礎上,改用膠體金標記物代替酶,省去底物顯色的步驟。試驗方法是以硝酸纖維素膜(NC膜)為載體,將試劑及標本滴加在膜上,通過滲濾而逐步反應。全過程可于數分鐘內完成,陽性結果在膜上呈紅色斑點。

試劑及材料

1. 滲濾裝置:為一塑料小盒(4x3x0.6cm),分為底、蓋兩層,蓋的中央有一個直徑0.5cm的小孔。盒底充填吸水性較強的墊料,蓋孔下,緊貼墊料放置一片NC膜。緊閉盒蓋,即為滲濾裝置。在孔中的NC膜上點加1-2ml特異性抗體(一抗)或抗原,室溫自然干燥,保存于放干燥劑的密封塑料袋中備用。

2. 封閉液:含0.2%BSA和0.05%吐溫-20的洗滌液。

3. 洗滌液:50mol/L,pH7.2 PBS。

4. 特異性抗體(一抗)或抗原

5. 金標抗體

操作方法

1. 取出滲濾器,先在小孔的NC膜上,滴加2滴(約100ml)封閉液;

2. 待其滲入盒內,在NC膜上,加待檢標本1滴(約50ml);

3. 待其滲入盒內,在NC膜上,滴加2滴(約100ml)洗滌液;

4. 待其滲入盒內,在NC膜上,加金標抗體1滴(約50ml),使其與NC膜上吸附的檢品發生反應;

5. 待其滲入盒內,在NC膜上,滴加2滴(約100ml)洗滌液;

6. 至洗滌液*滲入盒內

結果觀察

在小孔NC膜上出現紅色反應時為陽性反應,陰性反應不著色。

注意事項

1. 特異性抗體(一抗)或抗原、待檢標本和金標抗體的用量事先都必須應用方陣法確定zui適用量。

2. 盒底充填的墊料吸水性要強,否則影響結果。

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