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徠卡DM1000熒光顯微鏡用什么染料較好
徠卡DM1000熒光顯微鏡用什么染料較好
它可對細胞中的DNA和RNA同時染色而顯示不同顏色的熒光，DNA呈綠色熒光，RNA呈橙紅色熒光。EB:染色DNA和RNA熒光素雙醋酸酯(FDA)：FAD 本身無熒光,無極性,可透過完整的原生質膜。 一旦進入原生質體后,由于受到酯酶分解而產生 具有熒光的極性物質熒光素。它不能自由出入原 生質膜,因此有活力的細胞能產生熒光,無活力 的原生質體不能分解FAD無熒光產生。5mgFDA溶于1ml丙酮中,避光4℃下貯存,使用 時取0.22mlFDA貯存液加入5ml0.65mol/L甘露醇中.使用時,使終濃度為0.01%。
熒光染料Ho33342和若丹明123: 活細胞雙熒光染色觀察細胞核和線粒體。一般的生物染料不能穿透細胞膜，只有當細胞被固定后改變了細胞膜的通透性，染料才能進入細胞內。但有些活體染料能進入活細胞，并對細胞不產生毒性作用。熒光染料Ho33342和若丹明123都是活體染料。Ho33342能與細胞中DNA進行特異的結合，若丹明123能與線粒體進行特異的結合。采用兩種熒光染料的混合染液可對一個活細胞的核和線粒體同時染色。
熒光組化實驗中應注意的幾個問題
1．每種熒光染料，均有自己的適PH值，此時熒光強。當pH改變時，不僅熒光強度減弱，而且波長將有所改變，因此熒光檢測時要在一定的PH值的緩沖液中進行。
2．一放熒光染色在20。C以下時熒光比較穩定，溫度升高常出現溫度猝滅。
3．在熒光觀察中，常因激發光的增強而使樣品熒光很快衰竭，造成觀察和照相困難。為此用能量小的長波長光進行觀察，需照相時再適當增強激發光。
4．一般熒光染液的濃度在萬分之一以下，甚億萬分之一，也能使標本著色。在一定的限度內，熒光強度可隨熒光素的濃度增加而增強，但超過限度，熒光強度反而下降，這是由于熒光分子間的締合而使自身熒光猝滅所致。
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