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堿性磷酸酶染色液（偶氮偶聯(lián)法）
點(diǎn)擊次數(shù)：2221 發(fā)布時(shí)間：2016-6-14
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡(jiǎn)稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動(dòng)物組織內(nèi)，其活性所需zui適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜)，如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細(xì)膽管膜以及微動(dòng)脈和毛細(xì)血管動(dòng)脈部之內(nèi)皮，還見(jiàn)于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及平滑肌之細(xì)胞膜。
堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)不是采用金屬沉淀法來(lái)顯示堿性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時(shí)偶聯(lián)法)，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解，釋放出磷酸不萘酚，后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有產(chǎn)物，定位于細(xì)胞質(zhì)中。該染液可用于血液、骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色,堿性磷酸酶活性部位呈藍(lán)色，位于胞槳，結(jié)果較金屬鹽沉淀法可靠。
產(chǎn)品組成：
編號(hào) 名稱 | D2804 4×2ml | D2804 4×10ml | D2804 4×20ml | Storage | |
試劑(A):ALP固定液 | 2ml | 10ml | 20ml | RT避光 | |
試劑(B): ALP孵育液 | B1:AS-BI染色液 | 1ml | 5ml | 10ml | -20℃避光 |
B2:FBB染色液 | 1ml | 5ml | 10ml | -20℃避光 | |
臨用前，按 B1:B2=1:1 比例混合，即為 ALP 孵育液，即配即用。 | |||||
試劑(C):核固紅染色液 | 2ml | 10ml | 20ml | 4℃避光 | |
試劑(D):甲基綠染色液 | 2ml | 10ml | 20ml | RT避光 | |
使用說(shuō)明書 | 1份 | ||||
自備材料：
1、載玻片、濕盒
2、顯微鏡
操作步驟(僅供參考)：
(一)、涂片或切片
1、血液、骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無(wú)需固定)，水洗。
2、滴加配制好的ALP孵育液，放入濕盒中，避光孵育15～20min，水洗。
3、入核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染3～5min。
4、水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。
(二)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
1、取6孔板或其他容器培養(yǎng)的細(xì)胞，棄液，PBS清洗干凈。
2、加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10～15min，PBS清洗。
3、滴加配制好的ALP孵育液，放入濕盒中，避光孵育15～20min，PBS清洗。
4、入核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染3～5min。
5、PBS 清洗、鏡檢。
染色結(jié)果：
ALP活性部位 | 藍(lán)色 |
細(xì)胞核 | 紅色(核固紅)或綠色(甲基綠) |
血液、骨髓涂片結(jié)果判斷：
一般以積分報(bào)告結(jié)果，根據(jù) 100 個(gè)中性粒細(xì)胞陽(yáng)性顆粒進(jìn)行 0～4+計(jì)分。
細(xì)胞分值 | 染色特點(diǎn) |
0 | 無(wú)顆粒 |
1 | 稍有顆粒 |
2 | 中等程度顆粒 |
3 | 多數(shù)顆粒 |
4 | 充滿顆粒 |
臨床意義：
1、類白血病反應(yīng)積分明顯增高，未經(jīng)治療的慢性粒細(xì)胞白血病積分明顯減低。
2、急性細(xì)菌感染積分明顯增高，病毒感染積分多正常或減低。
3、再生障礙性貧血積分常增高，PNH、MDS積分常減低。
注意事項(xiàng)：
1、血液或骨髓細(xì)胞涂片或其他樣本均應(yīng)新鮮，薄厚適宜，及時(shí)固定，否則會(huì)影響酶的活性。
2、培養(yǎng)細(xì)胞染色操作過(guò)程中，清洗、染色等步驟都應(yīng)輕微，以免損傷或丟失細(xì)胞。
3、ALP孵育液易失效或降低陽(yáng)性強(qiáng)度，即配即用，不宜久置。
4、復(fù)染時(shí)，核固紅染色液或甲基綠染色液二者取其一。
5、每次染色時(shí)，應(yīng)有陽(yáng)性對(duì)照片。
有效期：6個(gè)月有效。