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葡聚糖凝膠使用說明
點(diǎn)擊次數(shù)：3074 發(fā)布時(shí)間：2016-8-29
葡聚糖凝膠使用說明
1 化學(xué)和物理性質(zhì)
葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度，因此它們的溶脹度和分級(jí)分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。
葡聚糖凝膠有不同的粒度。超細(xì)級(jí)的葡聚糖凝膠是用于需要*分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級(jí)和中級(jí)的凝膠用于制備性色譜過程，可在較低的壓力下獲得較高的流速。另外，粗級(jí)也可用于批量工藝。
1.1 化學(xué)穩(wěn)定性
葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑（除非它被化學(xué)降解）。它在水、鹽溶液、堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的，在強(qiáng)酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。長(zhǎng)期接觸氧化劑將破壞凝膠，因而應(yīng)避免使用。
1.2 物理穩(wěn)定性
葡聚糖凝膠并不熔融，可以在濕態(tài)、中性PH進(jìn)行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質(zhì)。干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。葡聚糖凝膠的機(jī)械強(qiáng)度取決于交聯(lián)度。
2 產(chǎn)品說明
產(chǎn) 品 名 稱 | 分 離 范 圍 | 應(yīng) 用 |
<700 | 緩沖液交換、脫鹽，分離小分子，去除小分子 | |
<1500 | 緩沖液交換、脫鹽，分離小分子，去除小分子 | |
1000-5000 | 工業(yè)上脫鹽及交換緩沖液 | |
1000-30000 | 多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測(cè)定 | |
2000-70000 | 蛋白分離純化、分子量測(cè)定、平衡常數(shù)測(cè)定 | |
2000-120000 | 蛋白分離純化、分子量測(cè)定、平衡常數(shù)測(cè)定 | |
5000-300000 | 蛋白分離純化、分子量測(cè)定、平衡常數(shù)測(cè)定 | |
5000-600000 | 蛋白分離純化、分子量測(cè)定、平衡常數(shù)測(cè)定 |
3 使用方法
3.1 乙醇浸泡
在室溫下，將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時(shí)，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干。
3.2 無鹽水浸泡
室溫下，在無鹽水中充分溶脹24小時(shí)，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹。
3.3 鹽酸浸泡
在常溫下再用0.1M HCl浸泡12小時(shí)，間隙攪拌，濾干，水洗只中性。
3.4 裝柱
將溶脹好的凝膠根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi)，注意保持濕態(tài)裝柱，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層。
3.5 平衡
上樣前平衡層析柱至少3-5個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）。
3.6 上樣
凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整；脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在40-50cm 以下，過高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時(shí)高徑比為5：1即可。
3.7 洗脫方法
可以用無鹽水，也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化。
3.8 清洗
每次用完之后，將柱子里的緩沖液置換為去離子水，然后用20%的乙醇封存。
3.9 在位清洗（CIP）
凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個(gè)柱體積，再以至少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。