制備細胞懸液：

對于貼壁生長的細胞，我們需要首先使用胰酶消化的方法使細胞從培養皿表面脫落

根據需要加入合適體積的培養基，將細胞進行中和及稀釋，以得到均質的細胞懸液。要求盡可能將細胞吹打散開，不要殘留任何細胞團

 

準備血細胞計數器：

使用70%乙醇將蓋玻片和血細胞計數器清潔干凈

將將蓋玻片潤濕（使用水或呼一口氣，目的是使蓋玻片與血細胞計數器接觸更緊密，易于粘連），并覆蓋至血細胞計數器上

 

臺盼蘭染色（可選）：

如果需要計算細胞的活力，則需要將細胞懸液和0.4%臺盼蘭等體積混合

室溫孵育3-5分鐘，使臺盼蘭*進入死細胞，使死細胞著藍色

 

血細胞計數器加樣：

使用吸管將細胞懸液或細胞/臺盼蘭混合液滴加到血細胞計數器計數池的邊緣。此時液滴將在虹吸的作用下進入蓋玻片下方的計數池

以同樣的方式在另一側的計數池中也加入細胞懸液

將計數板放置幾分鐘使細胞*擴散，同時用吸水紙吸除多余的液體

 

細胞計數：

在100倍顯微鏡下，移動計數板將視野對準計數板的中央大方塊，該方塊四周有一圈3條平行線包圍，中間有密集的網格。中央方塊區差不多剛好可以填滿整個視野（右上圖中標記的3號位置）

使用手持式計數器記錄計數池四個角以及中央方塊內的細胞數（1-5號位置，經典的current-protocol推薦每個方塊細胞數應不大于20-50），并重復記錄另一側計數池中的細胞數，總計十個方塊。計數的方法是只計算上邊和左邊壓線的細胞，而右邊和下邊壓線的細胞不予計算（下圖，總體原則是“計上不計下，計左不計右”，判斷標準為是否接觸三條邊線的中間線）。如果有多個細胞沒有吹散成團存在，此時只可記為一個細胞。如果團塊很多，則可能需要重新吹打甚至消化直至絕大多數細胞為單個細胞，

計算細胞數：

 

 

由血細胞計數器的構造可以看出，血細胞計數器每個大方塊可以容納的體積為：

1 mm2×0.1 mm = 0.1 mm3 = 10-4 cm3 = 10-4 ml

也即每個大方塊的體積為萬分之一毫升，因此在計算每毫升液體中的細胞數時需要乘以104。

 

在常規沒有使用臺盼蘭染色時，可以以下面公式計算每毫升培養基中細胞的個數：

 

每毫升培養基中細胞的個數 = 每個方塊內細胞的平均數 × 細胞稀釋比例 × 104

 

如何使用了臺盼蘭染色，還需要計算活細胞的比率：

 

活細胞比率 = 臺盼蘭拒染細胞數 / 總細胞數

此時細胞數的計算公式為：

 

每毫升培養基中活細胞的個數 = 每個方塊內細胞的平均數 × 活細胞比率 × 細胞稀釋比例 × 2 × 104

 

注：乘2是由于在臺盼蘭染色時，進行了等體積混合，相當于稀釋了一倍。