詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產品品質,價格實惠,多種規格供應,售后完善。
產品名稱 | 細胞質多聚腺苷酸結合蛋白3抗體 |
英文名稱 | CPEB3 |
規格 | 0.2ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質,可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯)胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。
杏葉防風英文名稱:Apricot Leaves wind保存:20℃,避光規格:6g化細胞核分離基因C蛋白一抗
鴉膽子英文名稱:Brucea javanica保存:20℃,避光規格:1g痛覺調節肽NPFF一抗
艾葉英文名稱:Leaf of moxa保存:20℃,避光規格:1gN酰基葡萄糖激酶一抗
綠萍英文名稱:Azolla保存:20℃,避光規格:2g神經酶4一抗
竹葉柴胡英文名稱:Herba Bupleuri保存:20℃,避光規格:5.0g鼻咽癌相關蛋白6一抗
聚雜質C(m6銨)英文名稱:Policresulen impurity C (m 6 ammonium sulfonate)保存:20℃,避光規格:30mg神經前體細胞發育下調蛋白4一抗
聚雜質B(m4,6二英文名稱:Policresulen impurity B (m 4,6 two sulfonylurea保存:20℃,避光規格:30mg神經元特異性蛋白家族成員2一抗
聚雜質A(m4銨)英文名稱:Policresulen impurity A (m 4 ammonium sulfonate)保存:20℃,避光規格:30mg核酪蛋白激酶和細胞周期蛋白依賴性激酶底物1一抗
鹽美金剛英文名稱:Memantine hydrochloride保存:20℃,避光規格:100mgNIFK蛋白一抗
(鹽托司瓊雜質)英文名稱:Tropine (tropisetron hydrochloride impurity)保存:20℃,避光規格:50mg化NIFK一抗
西尼地平英文名稱:Cilnidipine保存:20℃,避光規格:100mg核轉錄因子X盒結合蛋白1一抗
普羅寧英文名稱:Tiopronin保存:20℃,避光規格:100mg泛素結合酶E2F一抗
布地奈德英文名稱:Budesonide保存:20℃,避光規格:100mg1號染色體開放閱讀框63一抗
庚炔諾英文名稱:rethisterone enanthate保存:20℃,避光規格:100mgGO相互作用線粒體蛋白1一抗
孕三英文名稱:Pregnant three ketene保存:20℃,避光規格:50mg間變性淋巴瘤激酶核相互作用伴侶蛋白一抗
鹽哌立松英文名稱:Eperisone hydrochloride保存:20℃,避光規格:100mg化間變性淋巴瘤激酶核相互作用伴侶蛋白一抗
鹽普魯卡因雜質A英文名稱:Chloroprocaine hydrochloride impurity A保存:20℃,避光規格:50mg核仁蛋白C23一抗
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