原代細胞培養：

原代細胞（Primary cells）：是指直接從機體取出的組織或細胞獲得單個細胞并在體外進行培養的細胞。這里的組織主要指：組織器官、外周血及胚胎等。

原代細胞培養：由于原代細胞生長緩慢，繁殖一定的代數停止生長（一般10代以內）。所以一般認為：培養的原代的第1和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。

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具體步驟：

1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；

2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；

3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；

4. 消化期間，置于37°培養箱。每15min搖晃一次，消化時間根據腫瘤組織來定，約1-2h；

5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細胞濾網過濾細胞，收集；

6. 用培養基重懸，置于培養箱培養。
注意事項：

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和技術部溝通。

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