詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產品品質,價格實惠,多種規格供應,售后完善。
產品名稱 | 轉錄調節因子C/EBPγ抗體 |
英文名稱 | CEBP gamma |
規格 | 0.1ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質,可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯)胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。
大鼠羥脯氨酸(Hyp)死亡谷芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus vallismortis
大鼠骨保護素配體(OPGL)魔鬼弧菌拉丁屬名: Vibrio diabolicus
大鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)黃桿菌屬拉丁屬名: Flavobacterium aquatile
大鼠抗肌內膜抗體IgA(EMA IgA)大孢鏈霉菌拉丁屬名: Streptomyces macrosporus
大鼠鐵蛋白(FE)毛柄金錢菌(金針菇)用途: 用于科研教學。
大鼠碳酸酐酶2(CA-2)酒酒球菌拉丁屬名: Oenococcus oeni
大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)毛霉屬拉丁屬名: Mucor sp.
大鼠解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
大鼠抗胰蛋白酶(AT)中慢生華癸根瘤菌用途: 與紫云英共生結瘤固氮
大鼠胰島細胞抗體(ICA)四脊曲霉拉丁屬名: Aspergillus quadrilineatus
大鼠腎損傷分子1(Kim-1) 枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus subtilis
大鼠抗單核細胞抗體(AMA)肉色栓菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)西洼湖戈登氏菌拉丁屬名: Gordonia sihwensis
大鼠抗平滑肌抗體(ASMA)芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus aryabhattai
大鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)Escherichia拉丁屬名: Escherichia coli/DH5α
大鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)青霉屬注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
轉錄調節因子C/EBPγ抗體凋亡加強結構域蛋白4抗體Isomedicarpin中文名:別名:9-Hydroxy-3-methoxypterocarpan分子式:C16H14O4
4號染色體開放閱讀框34抗體Iriflophene 2-O-rhamside中文名:別名:分子式:C19H20O9
酪蛋白激酶1γ3/CKI γ3抗體3,4-Dimethoxybenzoic acid中文名:別名:分子式:C9H10O4
凋亡加強結構域蛋白9抗體3-Methoxy-5-heneicosylphel中文名:別名:5-Heneicosylresorcil 3-O-methyl ether分子式:C28H50O2
凋亡加強結構域蛋白8抗體Iriflophene中文名:鳶尾酚酮別名:分子式:C13H10O5