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ELISA試劑盒屬固相免疫測定
閱讀：609 發(fā)布時間：2014-8-5 在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育（incubation），有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當。
抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機會，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程，因此需經(jīng)擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA試劑盒反應總是需要一定時間的溫育。
溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。ELISA試劑盒在建立ELISA方法作反應動力學研究時，實驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1-2小時，產(chǎn)物的生成可達。為加速反應，可提高反應的溫度，有些ELISA試劑盒試驗在43℃進行，但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應4℃更為*，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中夜，以形成zui多的沉淀。但因所需時間太長，在ELISA試劑盒中一般不予采用。
使用注意事項
1、試劑變質(zhì)的跡象發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應當棄之。0標準的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時，表示試劑可能變質(zhì)。
2、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20～25℃)會導致所有標準的OD值偏低。
3、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
4、每加一種試劑前需將其搖勻。
5、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到30min。反之，則減短反應時間。
6、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
7、不要使用過了有效日期的ELISA試劑盒;也不要使用過了有效期的ELISA試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的ELISA檢測試劑盒會引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
操作時的室溫應嚴格限制在規(guī)定的范圍內(nèi)，標準室溫溫度是指20-25℃，但具體ELISA試劑盒操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時，ELISA試劑盒板只要平置于操作臺上即可。應注意溫育的溫度和時間應按規(guī)定力求準確。為保證這一點，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板同時測定。