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酶標記熒光信號放大技術(shù)的基本原理
 
    酶標記熒光(enzyme-labeledfluorescent)信號放大系統(tǒng)是另一種*的免疫熒光信號放大技術(shù)。其原理是酶促反應(yīng)(酶+底物)過程中在酶活性部位產(chǎn)生熒光沉積物，這樣一個過程稱為酶標熒光。目前可獲得許多產(chǎn)生熒光和發(fā)光的酶底物，例如ELF-97磷酸鹽、X—Gal、BCIP／NBT、堅固紅、堅固藍等。圖3—11顯示水溶性的ELF-97磷酸鹽底物通過磷酸酶的作用，轉(zhuǎn)為它的水解產(chǎn)物ELF-97乙醇。
 
    這種高度不溶性的二維分子在磷酸酶活性部位形成一種強黃綠色熒光沉積物。與其他含有分子內(nèi)氫鍵的結(jié)晶分子相同，ELF-97乙醇沉積物產(chǎn)生的熒光信號，不僅光穩(wěn)定性相當好，而且還具有特別大的Stokes移位。其光穩(wěn)定性比使用熒光黃交聯(lián)物直接或間接檢測得到的穩(wěn)定性都好。這種高度光穩(wěn)定性使得ELF-97乙醇標記的組織細胞在高倍鏡下非常容易聚焦和拍照。
 
 
    ELF-97磷酸酶底物是IHC、mRNA ISH以及在DNA芯片檢測DNA的強有力工具。與常規(guī)方法產(chǎn)生的放射性信號不同，ELF—97mRNA檢測信號可在幾分鐘內(nèi)甚至幾秒內(nèi)生成，而且可很清楚地與樣品的色素沉著分開。而且，在ISH應(yīng)用時，ELF-97乙醇的黃綠色熒光沉積物產(chǎn)生的信號強度，比直接標記的熒光探針原位雜交或用IHC方法的二級抗體熒光放大方法產(chǎn)生的熒光信號強許多倍。