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PCR電泳原理與分析
閱讀：90 發布時間：2024-12-3PCR電泳原理：
PCR電泳PCR電泳主要是瓊脂糖凝膠電泳。電泳儀有正負極的，而DNA是帶負電荷的。故而向正方向移動。
然后DNA里是有堿基的。堿基可以吸收紫外光。最重要的是有染色劑，常用的有溴化乙錠等等。一般在配制凝膠的時候會加進去，或者跑完電泳然后將凝膠浸在含有染色劑的溶液里，染色劑可以插入DNA鏈中。在可見光下是看不見條帶的，但在紫外光照射下就能出現條帶。
PCR擴增后一般進行瓊脂糖凝膠電泳分析，電泳后一般有以下幾種條帶：
1、引物帶。引物濃度過高或是擴增效率不是特別高時都會有，一般不呈現為細帶，為發散狀；如果目的擴增產物帶和引物帶都很亮，可以考慮適當降低引物量。
2、引物二聚體帶。比引物跑得慢一點，條帶清晰，但如果擴增產物小于100bp時，產物與引物二聚體就不好分別了，建議采用DNA聚丙烯酰胺電泳（不是蛋白質的SDS聚丙烯酰胺電泳）；如果引物二聚體在優化復性溫度后仍然嚴重影響目的產物的擴增，優先考慮更換引物設計（因為引物合成的成本比反復優化條件的成本低）
3、目的擴增產物帶。其大小與設計大小相同，條帶清晰。
4、非特異擴增產物帶。其大小與設計大小不相同，條帶清晰。一般考慮通過提高復性溫度來減少或消除（也可用溫度梯度功能來尋找的復性溫度，東勝龍811型PCR儀就有此功能）。如果其片段大小比目的片段大較多，可以通過減少延伸時間來減少或消除（即不給它足夠的延伸時間）。還有一種非特異擴增產物帶是來自于逆轉錄PCR實驗時的基因組DNA的污染，如果目的擴增產物中有內含子，擴增產物很可能大于目的基因。這種條帶通過優化復性溫度是不能消除的，可以在逆轉錄前用無RNA酶的DNA酶進行樣本處理。
5、模板DNA帶。模板濃度過高時可能出現。如果是基因組DNA為模板，條帶可能會很亂且較大。一般進行PCR擴增時，模板濃度都不要太大，否則會產生一些比目的基因長一點的雜質DNA（可能不成條帶，也看不到），這是由PCR擴增原理造成的。
分析PCR電泳圖：
1. 首先需要的是marker，即有既定片段長度的DNA片段。
2. 看膠，里點樣孔越近的DNA片段長度越大，離點樣孔遠的DNA片段長度小。以圖片看，5.6兩個孔的片段比前邊4個孔的片段短，如果你知道前邊4個孔的片段長度，可以估計一下。
條帶上方的模糊的一片應該是引物二聚體來的。做連接或者其他操作前用PCR產物回收試劑盒回收一下，就可以去掉引物二聚體了。