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技術(shù)文章

雞酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒樣本處理要求

閱讀:82          發(fā)布時(shí)間:2024-11-25

雞酸性磷酸酶(ACP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒用于測(cè)定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中酸性磷酸酶(ACP)含量。

實(shí)驗(yàn)原理:

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中雞酸性磷酸酶(ACP)水平。用純化的雞酸性磷酸酶(ACP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入酸性磷酸酶(ACP),再與HRP標(biāo)記的酸性磷酸酶(ACP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹di洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的酸性磷酸酶(ACP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中雞酸性磷酸酶(ACP)濃度。

樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

3. 尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

※注意:血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,以免影響檢測(cè)結(jié)果;如果樣本中的靶標(biāo)物檢測(cè)濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的最高值,請(qǐng)將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測(cè),建議正式實(shí)驗(yàn)前做預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定稀釋倍數(shù)。



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