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熒光顯微鏡應用于腫瘤輔助診斷研究
熒光顯微鏡應用于腫瘤輔助診斷研究
【案例背景】
深圳某科研檢測公司需要開展對腫瘤的輔助診斷研究，需要用到熒光原位雜交技術（Fluorescence In Situ Hybridization, FISH）. Mshot明美推薦了研究級熒光顯微鏡MF43-N搭配四通道光源MG-120，可以即開即用提供高質量的熒光和明場成像，可以自主選擇和升級熒光激發塊，可對FISH樣品進行單色熒光或雙色熒光觀察。搭配明美自主研發的FISH熒光原位雜交分析軟件，快速成像，自動著色，一鍵合成多色熒光圖像，直觀地判斷最終的實驗結果，功能強大，使用方便，效果得到客戶認可。
【實驗/設備條件】
防震的工作臺、暗室環境
【儀器/耗材清單】
明美研究級熒光顯微鏡MF43-N，載玻片，蓋玻片，香柏油
【樣品】
待檢的FISH樣品
【實驗/操作方法】
（一）概述
實驗主要使用明美研究級顯微鏡MF43-N和FISH熒光原位雜交分析系統進行，熒光顯微鏡用于熒光激發和放大FISH樣品的信號點，FISH熒光原位雜交分析系統可對熒光顯微圖像進行捕捉和處理。
（二）制樣
FISH樣品一般為手術組織切片，穿刺組織切片，腫瘤細胞塊等，不同樣品類型，制樣和染色方法會有不同。
①組織切片以HER2常規石蠟包埋組織切片為例，新鮮樣本取材后經過固定、水洗、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片和烘烤制備成常規切片，過程中特別注意固定和切片，樣品厚度保持在3-5um最佳。染色可分為預處理、雜交、洗滌、復染四步，尤其注意預處理的脫蠟、煮片、酶消化，以及雜交中的變性（加熒光探針）。
②細胞學樣品以產前染色體數目檢查為例，制樣經過低滲、預固定、滴片三步，需要充分的低滲和合適的細胞密度，可能需要用到倒置顯微鏡相襯觀察來控制細胞密度。染色也可分為預處理、雜交、洗滌、復染四步，預處理的消化和充分洗滌比較影響成像效果。
（三）觀察
①將制樣好的玻片放上載物臺，用樣品夾固定，在蓋玻片上滴一滴香柏油。
②把明美熒光顯微鏡的激發光切換到紫外熒光，物鏡切換到100X的油鏡，調節調焦機構使物鏡與香柏油接觸，然后左右微微旋轉物鏡轉盤，使物鏡與香柏油充分接觸，排出空氣，然后進行對焦
③選擇合適的樣品區域，分別用紫外、藍色和綠色激發光觀察FISH樣品，然后用明美FISH熒光原位雜交分析系統分別進行采圖，最后在軟件上對圖片進行合成處理，得到最終所需的FISH樣品圖片。
MF43-N+MSX11拍攝的FISH圖片
FISH樣品在紫外激發光的照射在，顯現出藍色的細胞輪廓的信號，在藍色激發光的照射下在細胞內顯現出綠色的探針信號，在綠色激發光的照射下在細胞內顯現出紅色的探針信號。
【實驗結果/結論】
選擇細胞核邊界完整、無重疊，標記的紅色信號和標記的綠色信號清晰的細胞，隨機計數至少20個細胞核中雙色信號。判斷信號點有無分離或者有無擴增等，并在專業的病理醫師或技術人員的指導下對結果進行判讀，保證結果的準確性。明美研究級正置熒光顯微鏡MF43-N采用優良的無限遠光學系統，搭配四通道光源MG-120，熒光激發信號強，并且可以即開即用，可以選配單通或雙通熒光激發塊，可供選擇的熒光波段繁多且亮度高，可滿足FISH領域的研究需要，也應用于生物制藥，醫學檢測、疾病預防等領域內的熒光檢測。
【場景圖/實拍效果圖】
熒光顯微鏡MF43-N，現場拍攝的FISH樣品效果圖
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來源：https://www.mshot.com/article/2058.html