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上海拜力生物科技有限公司

滑膜細胞原代培養(yǎng)|實驗技術(shù)服務(wù)

時間:2015-7-1閱讀:139

關(guān)鍵詞:滑膜細胞原代培養(yǎng)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介:世界*品牌滑膜細胞原代培養(yǎng)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
滑膜細胞原代培養(yǎng)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>一、實驗材料準備
1.   滑膜組織:將外科手術(shù)切下的組織在手術(shù)臺上請將標本放入低溫生理鹽水中,在手術(shù)完成時將標本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中帶回實驗室。
2.   試劑:4 mg/mlⅠ型膠原酶(α-MEM配制),培養(yǎng)液(含10%胎牛血清的α-MEM)。
3.   器械:手術(shù)器械。
二、方法
1.   將切下的組織在手術(shù)臺上請將標本放入低溫生理鹽水中(靜止),在手術(shù)完成時將標本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中帶回實驗室。
2.  在超凈臺中將標本放入培養(yǎng)皿中,加入α-MEM洗滌。
3.  獲得組織切開,仔細辨認于關(guān)節(jié)反折處及增生的白色光滑的滑膜組織,附于關(guān)節(jié)軟骨面的增生的血管翳也為滑膜組織(可作另一管消化),仔細剔除脂肪組織,用α-MEM洗二次(以去除紅細胞),放在小青瓶中用解剖剪銳性切碎。
4.   用雙倍獲得組織的體積含有4 mg/mlⅠ型膠原酶的α-MEM消化37℃孵育120分鐘(在此期間震動混勻數(shù)次)
5.   30分鐘后收集*管細胞:細胞懸液經(jīng)70 μm細胞濾網(wǎng)過濾,用1500-2000轉(zhuǎn)離心6分鐘,上清為Ⅰ型膠原酶加入未過濾網(wǎng)的組織,繼續(xù)用于消化。
6.   離心管底細胞用α-MEM離心洗滌2次,每次用α-MEM重懸浮后用1500-2000轉(zhuǎn),離心6分鐘,zui后一次用記數(shù)板觀察到有細胞。細胞zui終懸浮于含有10%胎牛血清的α-MEM中,接種到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
7.  60鐘后收集第二管細胞:細胞懸液經(jīng)70 μm細胞濾網(wǎng)過濾,用1500-2000 rpm離心6分鐘;用α-MEM洗2次,每次用α-MEM重懸浮后用1500-2000 rpm離心6分鐘,zui后一次用記數(shù)板觀察細胞并計數(shù)。細胞zui終懸浮于α-MEM含有10%胎牛血清中,接種到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
8.   必要時可做第三管細胞收集;并立即作原代滑膜細胞培養(yǎng)。
9.  每2-3天換液一次。
注意事項    
1.   用0.25% trypsin或0.25% trypsin+ 0.02% EDTA 或 collagenaseⅠ或collagenaseⅡ消化細胞或合用,只有單用collagenaseⅠ有用、;
2.   機械法很難獲得細胞;
3.  全培用α-MEM或RPMI1640或DMEM,加10%胎牛血清。不能用小牛血清,胎牛血清用國產(chǎn)即可;
4.  必須用Ca2+-free的PBS。

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