液相色譜法與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合,HPLC所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度,使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能,能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展,有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。
HPLC成為解決生化分析問題zui有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用,流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。
在醫(yī)藥方面液相色譜儀有以下四點(diǎn)重要作用:
?、俜蛛x分析藥物的組分含量:由于一種藥劑常含有多組分,色譜方法是既能分離又能定量的方法。如脂溶性維生素片,含有鉻維生素,有C18柱及含1%碳酸銨的甲醇為流動相。一次即可將各維生素B6、D1、A、E同時分離并定出含量。又如止痛藥或退燒藥也可用此法分離并測得各組分的含量。
?、谒幬锷a(chǎn)中進(jìn)行中間控制:生產(chǎn)抗菌素時,首先要了解發(fā)酵液中的主體與付產(chǎn)物的存在情況。例如:青霉素、四環(huán)素、頭孢子菌素、紅霉素、柔紅霉素、慶大霉素等的發(fā)酵產(chǎn)物,均可用C18柱和甲醇及緩沖液配制的流動相或用離子對法,分析主體及其收產(chǎn)物的含量。對普魯卡因酰胺、茶堿等可進(jìn)行主體含量的測定,對硝酸甘油可測定主體含量及其降解產(chǎn)物,以便保證藥物的熱量。
?、鄯治鏊幬镌隗w內(nèi)的殘量:這是近來研究新藥效能很主要的內(nèi)容之一,如冬凌草甲素是植物中的一組分,有抗癌效果,但是毒性大。測定其在血清中含量很重要,現(xiàn)在可用C18柱及甲醇水為流動相,測定處理后的血清樣品,即可得到血中的含量。如磺胺類藥品在血清及尿中含量也不允許太大,可用C18柱及酸性乙醇為流動相,測定含量后,則可估計zui合適的用藥劑量。又如四環(huán)素、巴比妥酸、止痛藥、退燒藥、護(hù)糖尿病的藥物等,在血或尿中的含量都可用C18柱用甲醇、水為流動相來測定含量。因此,反相色譜法應(yīng)用范圍極廣。
?、軠y定藥物在各種器官中的代謝產(chǎn)物,特別是研究藥物的代謝產(chǎn)物在血清中存在的情況。如測血清中的酮酸及戊二酸。測尿中代謝產(chǎn)物更為方便,不需要繁鎖的預(yù)處理。因?yàn)檠芯磕蛑械慕M分能鑒別病人的代謝功能,對病理研究或監(jiān)床診斷均具有重要的參考價值。