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Elisa操作問題及方法解決方案(歡迎下載)

閱讀:1159          發(fā)布時間:2015-5-19
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操作過程中可能出現(xiàn)的問題和解決方法

問題

可能原因

解決方法

顯色淡,靈敏度偏低

1、試劑盒在運輸途中時間太長,溫度太高

盡量縮短運輸時間,夏季應(yīng)放冰塊降溫


2、試劑盒未充分平衡

試劑盒從2~8℃冰箱取出后打開盒蓋,于室溫平衡至少20分鐘,確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)。


3、培養(yǎng)箱溫度不足37℃

注意培養(yǎng)箱溫度,放入反應(yīng)板后盡量減少開啟次數(shù)以免影響溫度恒定,非隔水式培養(yǎng)箱尤其應(yīng)注意


4、保溫時間不足

校正定時鐘準確定時


5、洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增加

按說明書要求保留洗滌時間,準確記住洗滌次數(shù)


6、移液器吸液量不足,吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔

校正移液器,吸嘴要配套,裝吸嘴時要緊密,吸嘴內(nèi)壁要清潔,一次性使用


7、蒸餾水水質(zhì)有問題

使用新鮮合格的蒸餾水


8、底物作用時間不足

準確定時

背景深,全部呈有色

1、洗滌不充分,洗后未拍干,樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留

濃縮洗液準確配制;10倍濃縮洗滌液如有結(jié)晶則應(yīng)讓結(jié)晶于室溫全部溶解后再量取稀釋;充分洗滌,*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用,不要反復(fù)使用,否則易造成污染


2、樣品污染

樣品應(yīng)新鮮采集,或低溫保存,防止污染


3、培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時間過長

調(diào)整培養(yǎng)箱溫度,準確定時


4、吸嘴重復(fù)使用,未洗凈或消毒不*

吸嘴盡可能一次性使用


5、蒸餾水被污染

使用新鮮蒸餾水


6、酶等試劑混用

不同批號試劑勿混用


7、一次實驗的標本量過多,加樣時間太長,導(dǎo)致實際反應(yīng)時間延長

合理安排實驗,避免幾塊酶標板同時加樣

重復(fù)性不佳

1、樣品數(shù)量多少不一,加樣時間有長有短

重復(fù)某一樣品時,加樣時間盡可能與*次接近


2、保溫時間不一致,洗滌條件不一致,操作人員不一致

重復(fù)測定標本,操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致,以排除這些因素造成的不一致的可能性


3、加樣量不一致

樣品稀釋前應(yīng)充分混勻,盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴

出現(xiàn)白板,陽性對照不顯色

顯色液變質(zhì)

更換新的顯色液


洗滌液配制有誤

請按說明書所示稀釋倍數(shù)配制


未加酶結(jié)合物而認為已加入

注意不要漏加


終止液誤作洗滌液稀釋或當?shù)孜镆菏褂?/span>

每次加液前均應(yīng)看清標簽

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