化工儀器網
技術文章
值得您看：進口試劑盒來說實驗室制取質粒的過程
閱讀：1061 發布時間：2014-4-8 一個春意濃重的清明小假過去啦，今天為止，朋友們開始進入正常的工作狀態中。新的一周中，上海恒遠給大家帶來的一個實驗方法，值得您看：進口試劑盒來說實驗室制取質粒的過程。
我們知道，質粒是攜帶外源基因進入細菌中擴增或表達的主要載體，它在基因操作中具有重要作用。分離與提取是zui常用、zui基本的實驗技術。
它的制取方法有很多的，一般情況下來，大多都是包括了細菌的培養、細菌的收集和裂解、質粒DNA的分離和純化這三個步驟。而今天上海恒遠給朋友們講說的實驗中，是以以堿裂解法為例，其中，我們要掌握堿裂解法抽提質粒的原理、步驟及各試劑的作用。
所需物品：
1、含有質粒pUC18載體的大腸桿菌菌液
2、克隆有水稻外源片段的BAC的大腸桿菌菌液
取過程
1、取含有pUC18質粒的大腸桿菌菌液于LA培養基上37℃過一個晚上培養；
2、用無菌牙簽挑取單菌落，接種于含有Amp抗生素的LB培養基中，37℃搖床~250 r/min過一個晚上培養；
3、吸取1.5 ml菌液，12000 g離心2分鐘，收集菌體，倒掉菌液；吸取1.5 ml菌液，再次收集菌體，盡量將菌液倒干凈；
4、加入300 ml溶液 I振蕩打勻,重新懸浮細胞，震蕩混勻（這里的時候，上海恒遠提醒注意：應*打勻沉淀或碎塊）；
5、加入300 ml溶液II，輕柔顛倒混勻，放置至清亮，一般不超過5分鐘；
6、加入300 ml溶液III顛倒混勻，放置于冰上10分鐘，使雜質充分沉淀；
7、12000 g離心10分鐘；
8、吸取800 ml上清液（注意！不要吸取到飄浮的雜質）至另一Eppendorf管中，加入2/3體積的異丙醇，室溫下放置5分鐘；
9、12000 g 常溫離心15分鐘；
10、倒盡上清，加75％乙醇浸洗除鹽（放置片刻或離心3分鐘后倒去上清）；
11、室溫放置或超凈臺上風干DNA；
12、加40 ml滅菌超純水或TE溶解；
13、質粒、BAC的質量檢測，于-20℃保存.
我們這個實驗的主要原理依據是在pH 12.0 ~ 12.6堿性環境中，細菌的線性大分子量染色體DNA變性分開，而共價閉環的質粒DNA雖然變性但仍處于拓撲纏繞狀態。將pH調至中性并有高鹽存在及低溫的條件下，大部分染色體DNA、大分子量的RNA和蛋白質在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質粒DNA仍然為可溶狀態.通過離心，可除去大部分細胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質，質粒DNA尚在上清中，然后用酚、氯仿抽提進一步純化質粒DNA。
以上就是今天的的實驗制取方法內容啦，我公司四月的新品進口試劑盒上線啦，均是以七折大賣的，需要的朋友們我公司何。