化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
上海恒遠為您特別分享：測定噬菌體滴度的方法
閱讀：1245 發(fā)布時間：2014-1-2噬菌體在微生物界同樣存在類似動植物界的食物鏈一樣的關(guān)系，噬菌體滴度是如何測定的呢？再次與朋友見面就已經(jīng)是2014年了，我公司的跨年*也已經(jīng)圓滿的結(jié)束了，而現(xiàn)在才是新年的開始，購我公司產(chǎn)品立送精美臺歷一個哦！下面來看看今天上海恒遠為您特別分享：測定噬菌體滴度的方法。
在宿主細胞過量的情況下，噬斑的數(shù)量隨著噬菌體的增加呈線性增加。由于這個原因，在感染以前，要將噬菌體進行稀釋，而不是將宿主細胞稀釋。以低MOI(感染重復(fù)性)鋪板，也可確保每一個噬斑僅包含一個DNA。
材料和試劑：
1、微波爐；
2、LB/IPTG/Xgal培養(yǎng) 板；
3、lb培養(yǎng)基；
4、頂層瓊脂糖凝膠。
操作步驟：
1、在5~10ml LB培養(yǎng)基中接種單個ER2537克隆，振搖孵育直至對數(shù)生長中期(OD600~0.5)。
2、在細胞生長時，微波融化頂層瓊脂糖凝膠，分裝至無菌培養(yǎng)管內(nèi)，每管3ml。維持在45℃?zhèn)溆谩?br>3、37℃預(yù)熱LB/IPTG/Xgal培養(yǎng)板，備用。
4、以LB培養(yǎng)基10倍比稀釋噬菌體。
建議稀釋范圍：對擴增的噬菌體培養(yǎng)上清，108-1011;對未擴增的篩選洗脫液，101-104。每次稀釋都換用新的加樣槍頭，使用氣溶膠阻隔槍頭以避免交叉污染。
5、一旦ER2537培養(yǎng)物長至對數(shù)生長中期，分裝至微量離心管中，每管200ml。
6、將倍比稀釋的噬菌體上清加入含細菌培養(yǎng)物的微量離心管中，一支微量離心管中僅加入一種稀釋液10ml，快速渦旋，室溫孵育1-5min。
7、轉(zhuǎn)移至含有45℃頂層瓊脂糖凝膠的管中，快速渦旋混勻，立即傾倒至預(yù)熱的LB/IPTG/Xgal平板上，輕緩搖動平板使頂層膠均勻分布。
8、冷卻平板5min，37℃倒置培養(yǎng)過一個夜。
9、噬斑計數(shù)以噬斑數(shù)為100左右的平皿為準，噬斑數(shù)乘以稀釋度即可獲得每10ml噬菌體的滴度-噬斑形成單位(pfu)。
朋友們，以上就是測定噬菌體滴度的方法啦，測定試驗過后記得把結(jié)果與心得記錄下來哦！這里是上海恒遠ELISA試劑盒供應(yīng)商，感謝朋友們對我公司的支持！