C5a,小鼠補(bǔ)體片斷5a酶聯(lián)免疫試劑盒技術(shù)指導(dǎo)用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠補(bǔ)體片斷5a（C5a）的含量。

C5a,小鼠補(bǔ)體片斷5a酶聯(lián)免疫試劑盒技術(shù)指導(dǎo)

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠補(bǔ)體片斷5a（C5a）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

 

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被小鼠補(bǔ)體片斷5a（C5a）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠補(bǔ)體片斷5a（C5a）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

C5a,小鼠補(bǔ)體片斷5a酶聯(lián)免疫試劑盒技術(shù)指導(dǎo)性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。處

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

操作步驟

實(shí)驗(yàn)開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

用于檢測未知抗體的間接法：

用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。

 　　↓

加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）

 　　↓

于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml， 　　37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。

 　　↓

加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

     ↓

終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

     ↓

結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

組成

48孔配置 96孔配置 保存

說明書 1份 1份

封板膜 2片(48) 2片(96)

密封袋 1個 1個

酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品：13.5U/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存

酶標(biāo)試劑 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

樣品稀釋液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

顯色劑A液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

顯色劑B液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

20倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 30ml×1瓶 2-8℃保存

樣品收集、處理

1、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。