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  • 適用于不同反應體積的重組酶聚合酶等溫擴增技術

    采用PCR或等溫擴增的方法來擴增DNA(或RNA)時,反應溫度在50℃以上,反應體積介于10-100ul之間,并且可能需要在樣品上覆蓋一層油性物質或采取相似的封閉操作。這是因為,在反應的過程中伴隨的蒸發現象致使反應體積不可過小,另一方面,較大的反應體積會消耗更多的耗材,并且在循環擴增過程中無法有效的進行溫度控制(達到預定的溫度需要較長的時間)。TwistDx’s提出的重組酶聚合酶擴增(RPA)技術對這一難題給出了解決方案。重組酶聚合酶擴增反應可在低溫(通常在37-42℃,可以在更低溫度下進行)下
  • pH的測定

    一、pH的定義溶液的酸堿性可用[H+]或[OH-]來表示,習慣上常用[H+]來表示。因此溶液的酸度就是指溶液中[H+]的大小。對于很稀的溶液,用[H+]來表示溶液的酸堿性往往既有小數又有負指數,使用不方便,因此常用pH值來表示溶液的酸堿性。pH值是指氫離子濃度的負對數,即pH=一lg[H+]例如:[H+]=10一7mol/L,pH=7;[H+]=10一9mol/L,pH=9;[H+]=10一3mol/L,Ph=3。pH值的使用范圍一般在0~14之間。pH值越小,溶液的酸性越強,堿性越弱;pH值越
  • 采用 CRISPR/Cas9介導敲入技術構建

    采用CRISPR/Cas9介導敲入技術構建可量化生產蛋白質的穩定細胞系從植物標本中提取的DNA是高度片段化的,因此提取短DNA分子的提取步驟非常嚴格。動物尸體DNA的提取方法和DNA文庫制備方法的改進,已經能夠有效提取小于50bp的DNA分子片段。因此,德國科學家RafalM.Gutaker等將這些改進方法應用到植物標本的DNA提取,并通過測序評估提取性能,該方法能夠對DNA片段長度的分布進行準確評估。與使用十六烷基*基溴化銨(CTAB)提取相比,使用N-笨甲酰溴(PTB)緩沖液提取的中間片段長
  • 導致PCR假陽性的污染源

    PCR反應的特點是具有較大擴增能力與*的靈敏性,但令人頭痛的問題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽性的產生。一、標本交叉污染源:收集標本的容器:標本放置時,由于密封不嚴溢于容器外,或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;吸樣槍:標本核酸模板在提取過程中,由于污染導致標本間污染;氣溶膠:zui可能造成PCR產物污染的形式。在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠,在操作時比較劇烈地搖動反應管,開蓋時、吸樣時及污染進樣槍的反復吸樣都可形成氣溶膠而污染。據計算一個氣溶膠顆粒可含48000拷貝,因而由其造成的
  • 植物標本超短DNA分子的提取

    從植物標本中提取的DNA是高度片段化的,因此提取短DNA分子的提取步驟非常嚴格。動物尸體DNA的提取方法和DNA文庫制備方法的改進,已經能夠有效提取小于50bp的DNA分子片段。因此,德國科學家RafalM.Gutaker等將這些改進方法應用到植物標本的DNA提取,并通過測序評估提取性能,該方法能夠對DNA片段長度的分布進行準確評估。與使用十六烷基*基溴化銨(CTAB)提取相比,使用N-笨甲酰溴(PTB)緩沖液提取的中間片段長度減少35%,改進DNA與硅膜的結合條件可以額外減少10%。他們并未觀
  • 基因的PCR擴增和DNA熔解分析

    TaqMan探針作為阻斷劑參與突變基因的PCR擴增和DNA熔解分析含TaqMan探針的非對稱PCR以及DNA熔解分析被應用于突變檢測,可有效用于臨床診斷。該方法簡單、成本低,在一個封閉的離心管中進行,可zui大限度的減少反應時間,減輕工作量,以及避免樣品間的交叉污染。盡管DNA熔解分析比DNA常規測序更加靈敏(兩者的突變檢測閾值分別為~5%和15%~20%),但相比與那些工作量大且昂貴的生物技術,如焦磷酸測序和微滴型數字PCR而言,其靈敏度相差甚遠。IrinaV.Botezatu等科學家證明,在
  • 培養基的分類

    一、化學分類:1.天然培養基,指一類利用動、植物或微生物體包括其提取物制成的培養基。2.組合培養基,又稱為合成培養基或綜合培養基,是一類按微生物的營養要求設計后用多種高純化學試劑配制成的培養基。如葡萄糖銨鹽培養基、淀粉硝酸鹽培養基等。3.半組合培養基,指一類主要以化學試劑配制,同時還加有某種或某些天然成分的培養基。例如,馬鈴薯蔗糖培養基。二、物理分類:1.固體培養基,一類外觀呈固態的培養基。根據性質又分為固化培養基、非可逆性固化培養基、天然固態培養基、濾膜。2.液體培養基,一類呈液態的培養基。3
  • 分層細胞膜微區調節細胞因子信號傳導從而影響受體二聚體的穩定性

    信號分子復合物動力學的結果顯示,信號分子復合物是調控細胞免疫特異性的關鍵。ChangjiangYou等科學家提出了一種實驗結合計算的研究方法,通過對細胞膜微區測量結果的量化構建了I型干擾素受體復合物動力學。通過長期的雙色量子點(QD)示蹤,他們發現單個由配體誘導產生的受體異源二聚體的壽命取決于細胞膜骨架(MSK)的完整性,這一點被證明對有效的下游信號也是至關重要的。通過成對關聯示蹤,定位顯微鏡以及快速量子點示蹤,識別了一個在300nm范圍內的第二限制。基于實驗數據,將一個定量空間隨機擴散反應模型
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