多模塊PCR的選擇要點有哪些?
閱讀:461 發布時間:2021-7-19
多模塊PCR是指在PCR擴增反應體系中加入熒光基團,通過對擴增反應中每一個循環產物熒光信號的實時檢測,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
實時多模塊PCR技術不僅實現了對模板的定量,且具有靈敏度高、特異性和可靠性更好、自動化程度高和無污染的特點,使得熒光定量PCR逐漸取代常規PCR。傳統的PCR進行檢測時,擴增反應后需要進行染色處理及電泳分離,并且只能作定性分析,不能準確定量,易造成污染出現假陽性,使其應用受到限制。
多模塊PCR的選擇主要看這些方面:
硬件設計:熒光定量PCR儀主要有傳統的96孔板式、創新的離心式等,每種設計都有它的獨到之處但也都有無法避免的缺憾。
鹵鎢燈的使用壽命短、更換成本較高已經成為很多用戶頭痛的問題。在實驗過程中鹵鎢燈作為一種熱光源,產生較多熱能對實驗結果有一定的影響。CCD大的優點就是可以同時掃描所有樣品中的熒光信號,但是靈敏度較低,而且同時檢測樣品間的熒光信號存在干擾。
運行速度:在熒光定量PCR儀的眾多技術參數中,升降溫速度也是廠家喜歡大力宣傳的指標。更快的升降溫,可以縮短反應進行的時間,而且縮短了可能的非特異性結合、反應的時間,提高PCR的特異性。
靈活性:大規模繁忙的實驗室設備固然讓人羨慕,但是常規實驗室同樣可以有精彩的選擇。現在的儀器供應商擁有眾多技術專家,有的還能提供整個分子生物學的基礎研究平臺,不但了解、滿足現在的需求,而且還考慮到了你可能變化的需求——升級和更換模塊。