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陽離子交換柱的使用方法簡介
閱讀：9618 發布時間：2012-6-2
陽離子交換柱的使用方法
注意
Chrompack IonoSpher C 色譜柱填充的是改性硅膠材料。向柱內導入堿性溶劑（pH>6.5）或酸性溶劑（pH<2.5）會溶解硅膠材料導致柱子損壞。
1. 簡介
Chrompack IonoSpher C 柱填充硅膠基質的強陽離子交換材料，含有磺酸鹽功能團。特別設計用于使用常規HPLC分析有機和無機陽離子。
2. 色譜柱老化
在開始分析工作以前，柱子必須經過正確的老化。一個沒有正確老化的柱子可能會帶來問題，諸如很差的柱效或者分離情況發生變化等等。
要老化這類柱子，首先要使用甲醇淋洗，然后使用去離子水。再用你選用的洗脫液進行平衡。
在發貨以前，每根柱子都已經測試過并進行了老化。因此沒有必要在*次使用時用水沖洗）。
3. 洗脫液
推薦在這類柱上使用的洗脫液是要求低電導的緩沖液，例如檸檬酸或酒石酸緩沖液（或其混合溶液），pH范圍從2.5到6.5，其中有乙二胺作為洗脫陽離子。
不能使用水楊酸緩沖液，因為水楊酸分解產物會改變固定相的性質。
洗脫液在使用以前要脫氣，并用0.5微米濾膜過濾，防止發生檢測和泵送問題。
一定要在開始使用系統以前檢查有否微生物生長，否則你的柱子會堵塞，柱壓會升高到無法接受的水平。
Chrompack IonoSpher C 色譜柱填充的是改性硅膠材料。向柱內導入堿性溶劑（pH>6.5）或酸性溶劑（pH<2.5）會溶解硅膠材料導致柱子損壞。
1. 簡介
Chrompack IonoSpher C 柱填充硅膠基質的強陽離子交換材料，含有磺酸鹽功能團。特別設計用于使用常規HPLC分析有機和無機陽離子。
2. 色譜柱老化
在開始分析工作以前，柱子必須經過正確的老化。一個沒有正確老化的柱子可能會帶來問題，諸如很差的柱效或者分離情況發生變化等等。
要老化這類柱子，首先要使用甲醇淋洗，然后使用去離子水。再用你選用的洗脫液進行平衡。
在發貨以前，每根柱子都已經測試過并進行了老化。因此沒有必要在*次使用時用水沖洗）。
3. 洗脫液
推薦在這類柱上使用的洗脫液是要求低電導的緩沖液，例如檸檬酸或酒石酸緩沖液（或其混合溶液），pH范圍從2.5到6.5，其中有乙二胺作為洗脫陽離子。
不能使用水楊酸緩沖液，因為水楊酸分解產物會改變固定相的性質。
洗脫液在使用以前要脫氣，并用0.5微米濾膜過濾，防止發生檢測和泵送問題。
一定要在開始使用系統以前檢查有否微生物生長，否則你的柱子會堵塞，柱壓會升高到無法接受的水平。
4. 流量和壓力
| 柱內徑（毫米） | 流速（ml/min）* | 流速（ml/min）zui高 |
| 2.0 | 0.2 | 1.0 |
| 3.0 | 0.4 | 2.0 |
| 4.6 | 1.0 | 4.0 |
| 10.0 | 4.7 | 18.0 |
注意：zui高壓力：不銹鋼柱：4500psi;玻璃柱：3000psi
增加流速或者降低流速要采取小的間隔變化以防止填充床的擾動。
如果你想更換柱子，要降低流量至0，等待洗脫液*流出柱子為止（2分鐘）。
拆除柱子而沒有等待壓力的降低會損壞柱子。
高柱壓的產生一般是由于不正確地使用柱子的結果。
使用保護柱（見第6節）會防止污染物沉積在分析柱上。
5. 樣品處理
保持柱子長壽的關鍵是進樣前適當的的樣品處理。你必須防止將疏水性/與流動相極性差別很大的化合物泵入色譜柱，不管是來自流動相還是樣品。特別地，要禁止導入顆粒雜質。這些zui終都會造成操作壓力的增高而且非常困難或者不可能去除。
6. 保護柱
一定要使用保護柱，因為樣品和洗脫液污染可能會造成柱壓力的增高而且影響選擇性。對于ChromSep 柱我們建議使用ChromSep Cation 交換保護柱。當柱壓增高的或者觀察到柱效降低的時候就需要更換保護柱了。對于常用不銹鋼柱，我們建議使用Chromguard Cation exchange High Efficiency（）柱（10X3.0mm）或High Capacity（高容量）柱（50X3.0mm）。
7. 進樣量和濃度
| 柱尺寸（長度*內徑） | zui大樣品體積 |
| 250×2.0mm | ±10μl |
| 200×3.0mm | ±15μl |
| 250×4.6mm | ±50μl |
| 250×10.0mm | ±250μl |
當樣品的洗提強度比洗脫液低（在柱樣品預濃縮）的時候，更高的樣品量也可以注射。
8. 溫度
Chrompack IonoSpher C 柱可以在室溫環境使用。為了提高柱子的穩定性，建議不要在40°C以上使用。
Chrompack IonoSpher C 柱可以在室溫環境使用。為了提高柱子的穩定性，建議不要在40°C以上使用。
9. 貯存
在貯存柱子以前，建議先用去離子水，然后用甲醇沖洗。一定不要在柱子內充滿緩沖液或者其他含鹽類的洗脫液的情況下貯存色譜柱。
在貯存柱子以前，建議先用去離子水，然后用甲醇沖洗。一定不要在柱子內充滿緩沖液或者其他含鹽類的洗脫液的情況下貯存色譜柱。
10. 檢測靈敏度
對于陽離子的檢測，建議進行電導率的測定,使用前面提到的低電導洗脫液。
對于陽離子的檢測，建議進行電導率的測定,使用前面提到的低電導洗脫液。
11.柱效損失的可能原因
1）額外的峰展寬。要保證管路的長度和內徑都保持zui小。
2）洗脫的平衡時間不夠。
3）不正確的洗脫液pH或洗脫液的離子強度。
4）洗脫液中存在不正確的陰離子。制備新鮮的洗脫液。
5）固定相污染。
a.高柱壓伴隨分辨率降低。
1] 顆粒物積聚在燒結物或者填充物床上。
（a）樣品來源---過濾或離心
（b）洗脫液來源---過濾洗脫液，封閉洗脫液容器。
（c）系統來源---沖洗整個系統管路和泵;安裝在線系統過濾器。
2] 蛋白質類物質的積聚
（a）微生物在樣品中生長。
（b）微生物在洗脫液中生長。
b. 正常柱壓伴隨柱效降低
1] 有機污染
（a）樣品中有脂肪，油脂，脂質。固定相的表面被覆蓋。
（b）從樣品中帶來的不確切的有機物或未正確制備的洗脫液。
（c）在洗脫液制備完成以后帶入洗脫液中的非特定有機物，例如在運輸時從大氣中帶來。
1）額外的峰展寬。要保證管路的長度和內徑都保持zui小。
2）洗脫的平衡時間不夠。
3）不正確的洗脫液pH或洗脫液的離子強度。
4）洗脫液中存在不正確的陰離子。制備新鮮的洗脫液。
5）固定相污染。
a.高柱壓伴隨分辨率降低。
1] 顆粒物積聚在燒結物或者填充物床上。
（a）樣品來源---過濾或離心
（b）洗脫液來源---過濾洗脫液，封閉洗脫液容器。
（c）系統來源---沖洗整個系統管路和泵;安裝在線系統過濾器。
2] 蛋白質類物質的積聚
（a）微生物在樣品中生長。
（b）微生物在洗脫液中生長。
b. 正常柱壓伴隨柱效降低
1] 有機污染
（a）樣品中有脂肪，油脂，脂質。固定相的表面被覆蓋。
（b）從樣品中帶來的不確切的有機物或未正確制備的洗脫液。
（c）在洗脫液制備完成以后帶入洗脫液中的非特定有機物，例如在運輸時從大氣中帶來。
12. 對于糾正污染問題的可能有效的操作
1）準備新鮮的洗脫液
在很多情況下，柱效的喪失可以歸結為洗脫液的污染。所以，要在使用柱子以前準備新鮮的洗脫液，沖洗所有液體管路。洗脫液應當用0.2到0.4微米的濾膜過濾，在使用以前要脫氣。
2）色譜柱再生
要進行色譜柱的再生工作
a. 首先倒轉色譜柱
b. 以0.4ml/min的流速用1M NH4NO3洗脫30ml。
c. 以0.4ml/min的流速用40：60 （v：v）的甲醇/水洗脫30ml。
d. 以0.4ml/min的流速用異丙醇洗脫30ml。
e. 以0.4ml/min的流速用水洗脫30ml。
f. 以0.4ml/min的流速用洗脫液洗脫30ml。
g. 將柱子轉回正常方向。
用洗脫液平衡。
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