色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。
如何評價一根色譜柱的好壞呢?
主要標準也就是那些zui影響分離的因素,這些因素通常都需要比較才知道,只從柱子的粒徑、孔徑、載碳量上是看不出來的,色譜工作者zui關心的是:柱效(理論塔板數)、分離度、柱壓、拖尾因子、色譜柱的重現性、穩定性、pH使用范圍、使用壽命這幾個指標。使用者也是主要從這幾個指標來對比評價一根柱子的好與壞。
在填料的諸多特性中,使用者zui關心的是以這些填料裝成色譜柱后的分離效率、對溶質的選擇性,在不同pH介質中的穩定性,不同批次填料間性能的重現性以及較適宜的操作壓力。當用于生物樣品的分離與分析時,還需要考慮柱子的樣品負載量和回收率等指標。
通常,以的一組標準溶質為樣品,測定它們在柱子上的理論塔板數,以作為柱效的衡量指標。
柱性能指標包括在一定實驗條件下(樣品、流動相、流速、溫度)下的柱壓、理論塔板高度和塔板數、對稱因子、容量因子和選擇性因子的重復性,或分離度。一般說來容量因子和選擇性因子的重復性在±5%或±10%以內。進行柱效比較時,還要注意柱外效應是否有變化。
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