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恒遠(yuǎn)告訴大家：微生物的分離純化及稀釋平板菌落計數(shù)的實驗原理
閱讀：1970 發(fā)布時間：2013-3-15實驗原理
稀釋平板測數(shù)是根據(jù)微生物在高度稀釋條件下固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落是由一個單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細(xì)胞。計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的繁殖稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使其成單個細(xì)胞存在，否則一個菌落就不只是代表一個細(xì)胞，再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細(xì)胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數(shù)目，即可計算出樣品中的含菌數(shù)。此記數(shù)方法所計算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長出來的菌落數(shù)，故又稱活菌計數(shù)。一般用于某些產(chǎn)品檢定，如根瘤菌劑等產(chǎn)品檢定，生物制品檢驗，土壤含菌量測定及食品、水源的污染程度的檢驗。
自然條件下，微生物常以群落狀態(tài)存在，這種群落往往是不同種類微生物的混合體。為了研究某種微生物的特性或者要大量培養(yǎng)和使用某種微生物，必須從這些混雜的微生物群落中獲得純培養(yǎng)，這種獲得純培養(yǎng)的方法稱為微生物的分離與純化。
在自然界中，土壤是微生物生活的良好環(huán)境，其中生活的微生物數(shù)量和種類都是極其豐富的，因此土壤是人類開發(fā)利用微生物資源的重要基地。土壤中的微生物數(shù)量、種類與土壤肥力有關(guān)，肥沃的土壤中多，貧瘠土壤中少。其生理類群則與土壤的其它理化性質(zhì)，如通氣、pH有關(guān)，例如在通氣良好的菜園土中，好氣性微生物占有優(yōu)勢。本實驗以菜園土為材料分離土壤中的好氣性細(xì)菌，并進(jìn)行數(shù)量測定。
分離微生物時，一般是根據(jù)該微生物對營養(yǎng)、pH、氧氣等要求的不同，供給它們適宜的生活條件，或加入某種抑制劑造成只利于該菌種生長，不利于其它菌種生長的環(huán)境，從而淘汰不需要的菌種。分離微生物常用的方法有稀釋平板分離法和劃線分離法，根據(jù)不同的材料，可以采用不同方法，其zui終目的是要在培養(yǎng)基上出現(xiàn)欲分離微生物的單個菌落，必要時再對單個菌落進(jìn)一步分離純化。在用稀釋平板分離微生物時，還可以同時測定待分離的微生物的數(shù)量。
放線菌與細(xì)菌同屬原核微生物，是重要的抗生素產(chǎn)生菌，在土壤中的數(shù)量僅次于細(xì)菌，尤其是在有機質(zhì)豐富、透氣性好的中性到微堿性土壤中的數(shù)量較多。本實驗采用高氏一號瓊脂培養(yǎng)基分離和計數(shù)菜園土中的放線菌。
真菌在土壤中的數(shù)量次于細(xì)菌和放線菌，主要在有機質(zhì)豐富、透氣性好的偏酸性土壤中較多。分離土壤中的真菌并不難，但由于其菌落大，容易擴展，計數(shù)準(zhǔn)確性較低。本實驗采用加有氯霉素或慶大霉素和孟加拉紅的馬丁氏培養(yǎng)基分離及計數(shù)菜園土中的真菌。按一般資料介紹為鏈霉素，但此種抗生素要先配成一定濃度的溶液，且應(yīng)于倒平板前才加入培養(yǎng)基中。在此培養(yǎng)基上，放線菌和細(xì)菌被氯霉素或慶大霉素和孟加拉紅所抑制，但大多數(shù)真菌能夠生存，且其菌落受孟加拉紅的抑制而較小，從而避免了某些真菌的擴散蔓延而帶來的數(shù)量上的誤差。