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教你血球計數板細胞計數的方法

閱讀:7120          發布時間:2020-7-8

1.制備細胞懸液:對于懸液培養的細胞,可直接進行下面的步驟2(計數與計算過程)。如果計數對象為貼壁生長的細胞,首先需將培養物按如下步驟制備成細胞懸液。

①終止培養,將培養液吸出,用PBS洗培養物一次。

②給培養瓶內加入1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,于37℃消化3~5min 。期間不斷在鏡下觀察。當細胞變圓接近脫壁時,棄消化液。

③加入一定量的培養液(如果這些培養細胞不再有用,可加PBS),用吸管吹打,使細胞脫壁而制成細胞懸液。

2.計數與計算過程

①在細胞計數板中央放置計數的蓋玻片。

②用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數板凹蹧處流出懸液,至蓋玻片被液體充滿為止。

③置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數。對于壓線的細胞只計數在上線和左線者,對于細胞團按單個細胞計數。

④按下式計數細胞懸液的密度:細胞密度=(4個大格細胞總數/4)×104個/ml 。

二、注意事項:

①務必使分散成單個細胞,取樣計數前,充分混勻細胞懸液。

②顯微鏡下計數時,遇到2個以上細胞組成的細胞團,應按單個細胞計算。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分。

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