Hoechst33258染色試劑盒
細(xì)胞凋亡熒光Hoechst 33258檢測(cè)試劑盒
（Apoptotic Cell Hoechst 33258 Detection Kit）
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Expire date：
一、試劑盒說(shuō)明
細(xì)胞凋亡時(shí)產(chǎn)生zui顯著的變化是染色體固縮，DNA裂解使細(xì)胞核形態(tài)產(chǎn)發(fā)生變化。本試劑盒提供的熒光染料Hoechst 33258是一種無(wú)毒、水溶性雙苯咪唑類化合物，可作為熒光探針與DNA分子結(jié)合。在凋亡細(xì)胞中，細(xì)胞膜對(duì)Hoechst 33258的攝取增高，并且由于染色體高度濃縮，Hoechst 33258與之結(jié)合增強(qiáng)，染色呈強(qiáng)藍(lán)色熒光，而正常細(xì)胞只呈微弱熒光，死細(xì)胞則不被染色，由此可檢測(cè)出凋亡。
二、試劑盒組份
| 組份 | KGA211（100 assays） | 儲(chǔ)存條件 |
| Hoechst 33258 | 1.0 mL | 4℃，避光 |
| Buffer A | 25 mL | 4℃ |
注: Hoechst 33258工作液的配制：使用前，取試驗(yàn)盒中Hoechst 33258原液用蒸餾水稀釋10倍。
三、試劑盒以外自備儀器和試劑
熒光顯微鏡、低速離心機(jī)、微量移液器、1.5m L Microtube、載玻片、蓋玻片、4%甲醛溶液
四、使用注意事項(xiàng)
1． 染色時(shí)間嚴(yán)格控制，染色過(guò)久可導(dǎo)致假陽(yáng)性。
2． 由于不同細(xì)胞對(duì)Hoechst 33258的攝取能力不同，該法不一定適用所有細(xì)胞。
五、操作方法
1. 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
2. 用冷Buffer A洗滌細(xì)胞二次，離心收集 106細(xì)胞于1.5mL微量離心管中；
（貼壁細(xì)胞原位固定染色）
3. 加入1mL 的4%甲醛溶液（用戶自備），4℃固定細(xì)胞10min；
4. 離心去固定液，用Buffer A洗兩遍；離心后留50～100μL Buffer A重懸細(xì)胞；
5. 取上步驟50～100μL細(xì)胞懸液涂片，自然晾干；
6. 滴加100μL Hoechst 33258工作液（備注1），室溫染色10 min，水沖凈晾干；
7. 以紫外光340nm波長(zhǎng)激發(fā)，熒光顯微鏡下觀察。
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