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人α干擾素酶聯免疫分析試劑盒組成及實驗方法
最近更新時間:2011-8-23
提 供 商:上海研生實業有限公司資料大小:8.5KB
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人α干擾素酶聯免疫分析試劑盒組成及實驗方法點擊次數:19 發布時間:2011-7-21
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品(64μg/L) 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
32μg/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
16μg/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
8μg/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
4μg/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
2μg/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
操作程序總結:
1.準備試劑,樣品和標準品
2.加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘
3.洗板5次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘
4.洗板5次,加入顯色液A、B,37℃反應10分鐘
5.加入終止液
6.15分鐘之內度OD值