目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>信號系列>> BC5480-50T/48S一氧化氮（NO）含量檢測試劑盒 信號
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T/48S |
| 貨號 | BC5480 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農業,綜合 |
| 主要用途 | 一氧化氮（NO）含量檢測 |
一氧化氮（NO）含量檢測試劑盒說明書（化學法）
可見分光光度法
貨號：BC5480
規格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色液A液 | 2-8℃保存 | |
顯色液B液 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前加入15mL蒸餾水，可50℃助溶，2-8 ℃可保存12周。冷卻至常溫使用；
2、 顯色液：臨用前根據樣本數量按照顯色液A液：顯色液B液=250μL: 250μL（500μL，1T）的比例配制顯色液，充分混勻，現配現用；
3、 標準品：10μmol/mL亞*酸鈉。
4、 0.025μmol/mL標準溶液的配制：取50μL 10μmol/mL亞*酸鈉，加入950μL蒸餾水，配制濃度為0.5 μmol/mL；再取50μL 0.5μmol/mL亞*酸鈉和950μL蒸餾水混勻配制成0.025 μmol/mL的標準溶液備用。
產品說明：
一氧化氮（Nitric Oxide，NO）是一種極不穩定的生物自由基，分子小，結構簡單，常溫下為氣體，微溶于水，具有脂溶性，可快速透過生物膜擴散，作為一種新型的生物信使分子，在細胞間及細胞內發揮傳遞信號的作用。其廣泛分布于生物體內各組織中，特別是神經組織中。在機體神經、循環、呼吸、消化、泌尿生殖等系統中也起著十分重要的作用。
NO在體內或水溶液中極易氧化生成NO2-。在酸性條件下，NO2-與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物，進一步與萘基乙烯基二胺偶合，產物在550nm處有特征吸收峰，測定其吸光值，可以計算NO含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、分析天平、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1. 組織樣本：按質量（g）: 提取液體積（mL）2 ~5：10的比例加入提取液（建議稱取0.2g樣本，加入1.0mL提取液），冰浴勻漿后，于4℃，10000g，離心15min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。
2. 細菌/細胞樣本：按細菌/細胞數量（104）：提取液體積（mL）1000~2000 : 1的比例加入提取液（建議1000萬細菌/細胞加入1.0mL提取液），冰浴超聲破碎細菌/細胞（功率200W，超聲3s，間隔7s，總時間5min），然后于4℃，10000g，離心15min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。
3. 血清（血漿）等液體樣本：直接測定。若液體有渾濁則離心取上清測定。
二、測定步驟
1．可見分光光度計預熱30min以上，調節波長至550nm，蒸餾水調零。
2．在1.5mL EP管按下表順序加樣：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
蒸餾水 | - | - | 500 |
標準品 | - | 500 | - |
樣本 | 500 | - | - |
試劑一 | 250 | 250 | 250 |
充分混勻，常溫靜置5min，于4℃，10000g離心5min，取上清（標準管、空白管可不進行此步驟） | |||
上清液 | 500 | 500 | 500 |
顯色液 | 500 | 500 | 500 |
混勻，常溫靜置10min，于550nm處測定各管吸光值，分別記為A測定、A標準和A空白，計算ΔA測定=A測定-A空白，ΔA標準=A標準-A空白。空白管和標準管只需測1-2次。 | |||
三、NO含量計算
1. 按樣本蛋白濃度計算
NO含量（μmol/mg prot）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷(V樣×Cpr) = 0.025×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr
2. 按樣本質量計算
NO含量（μmol/g 質量）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷(W×V樣÷V樣總) = 0.025×ΔA測定÷ΔA標準÷W
3. 按細菌/細胞數量計算
NO含量（μmol/104 cell）=ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷(V樣×N÷V樣總) = 0.025×ΔA測定÷ΔA標準÷N
4. 按液體體積計算
NO含量（μmol/mL）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷V樣= 0.025×ΔA測定÷ΔA標準
C標：標準管濃度，0.025μmol/mL；V樣：加入樣本體積，0.5mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；N：細菌/細胞總數，以104計。
注意事項：
1、 如果?A測定小于0.005，可以增加樣本量后再進行測定；如果?A測定大于0.5，建議將樣本上清用提取液適當稀釋后再進行測定。注意同步修改計算公式。
2、 如果樣本上清有顏色（在550nm下有吸收峰），則需要補測樣本的對照管，即將顯色液用相同體積的蒸餾水代替。在550 nm下測定吸光值A，分別記為 A標準、A測定、A空白、A對照，計算ΔA標準=A標準-A空白，ΔA測定=A測定-A對照。此時試劑盒規格為50T/24S。
實驗實例：
1. 取0.203g合歡葉片樣本，加入1mL提取液進行冰浴勻漿，離心后取上清，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算：ΔA測定=A測定-A空白=0.046-0.000=0.046，ΔA標準=A標準-A空白=0.290-0.000=0.290，按樣本質量計算得：
NO含量（μmol/g 質量）=0.025×ΔA測定÷ΔA標準÷W = 0.0195 μmol/g 質量。
2. 取0.215g小鼠心臟樣本，加入1mL提取液進行冰浴勻漿，離心后取上清，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算：ΔA測定=A測定-A空白=0.082-0.000=0.082，ΔA標準=A標準-A空白=0.290-0.000=0.290，按樣本質量計算得：
NO含量（μmol/g 質量）=0.025×ΔA測定÷ΔA標準÷W = 0.0329 μmol/g 質量。
3. 取500μL人血清樣本，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算：ΔA測定=A測定-A空白=0.028-0.000= 0.028，ΔA標準=A標準-A空白=0.290-0.000=0.290，按液體體積計算得：
NO含量（μmol/mL）=0.025×ΔA測定÷ΔA標準 = 0.0024 μmol/mL。
參考文獻：
[1] Green LC, Wagner DA, Glogowski J. et al. Analysis of nitrate, nitrite, and [15N]nitrate in biological fluids[J]. Analytical Biochemistry, 1982, 126(1): 131-138.
[2] Thomsen LL, Ching LM, Baguley BC. Evidence for the production of nitric oxide by activated macrophages treated with the antitumor agents flavone-8-acetic acid and xanthenone-4-acetic acid [J]. Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 1990, 50(21): 6966-6970.
[3] Yang Wenping, Li Junmin, Wang Jinwen. Comparison of determination methods of serum nitric oxide content[J]. Experimental and Laboratory Medicine, 2002, 20(03): 147-148.
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